研究背景与目的:肺癌是目前全球范围内发病率和致死率都位居高位的肿瘤之一,据统计,全世界肺癌患者的5年生存率约为19%。在确诊的肺癌患者中大约有85%属于非小细胞肺癌（NSCLC）。绝大多数的NSCLC患者在确诊时已处于癌症晚期。尽管近年来技术和治疗手段不断发展,但是仍有超过70%的患者死于肿瘤转移。因此,发现和深入研究NSCLC转移的机制对NSCLC的治疗有着至关重要的作用。上皮间质转化（epithelial-mesenchymal transition,EMT）被普遍认为是肿瘤转移的早期必要事件。在EMT发生过程中,上皮细胞极性丢失,细胞间连接减弱并使细胞获得远端转移和侵袭的能力。在细胞分子表达水平上,细胞发生EMT时包括E-钙粘蛋白（E-cadherin）、ZO-1和角蛋白在内的上皮标志物表达下调,同时,诸如波形蛋白（Vimentin）和N-钙粘蛋白（N-cadherin）等间质标志物的表达发生上调。转化生长因子β（transforming growth factor-β,TGF-β）信号通路是近年来发现的可诱导多种肿瘤细胞发生EMT和侵袭的重要信号通路。研究表明,TGF-β在NSCLC患者组织中呈高表达状态。本课题组以往的研究发现TGF-β可以显著促进NSCLC细胞的EMT以及迁移和侵袭。Myocardin（MYOCD）被普遍认为是在心肌和平滑肌细胞（SMC）发育和分化过程中发挥关键作用的血清响应因子（serum response factor,SRF）的重要辅助因子。MYOCD在高分化的侵袭性强的腹膜平滑肌肉瘤中高表达,但是在子宫肉瘤中MYOCD却呈低表达状态。但是,MYOCD在NSCLC发生发展过程中的作用却鲜有报导。本研究旨在探究NSCLC发生EMT和侵袭过程中MYOCD所扮演的角色及其诱导NSCLC发生EMT过程中的具体机制,阐明MYOCD在NSCLC中的作用及其分子调控机制。以期加深我们对NSCLC转移的理解并为新治疗策略的开发提供新的方向。研究方法:（1）通过mRNA芯片技术检测TGF-β诱导的EMT过程中细胞中mRNA的表达变化并利用qRT-PCR和Western blot验证芯片结果。（2）敲低和过表达MYOCD后利用Western blot和transwell实验检测MYOCD的动态表达对NSCLC细胞EMT和迁移及侵袭的影响。（3）过表达MYOCD后构建裸鼠肿瘤转移模型检测MYOCD对肿瘤细胞在小鼠体内转移能力的影响。（4）利用免疫沉淀和免疫荧光实验验证MYOCD和SMAD3的结合。（5）分别提取细胞核和细胞质蛋白,验证MYOCD的动态变化对SMAD3/SMAD4复合物胞核定位的影响。（6）利用qRT-PCR和Western blot检测TGF-β/SMAD信号通路中关键基因的表达变化。（7）构建相应的启动子区双荧光报告载体,检测MYOCD对SMAD3调控的下游基因的转录调控影响及SMAD3和SMAD4对MYOCD启动子区荧光活性的改变。（8）通过染色质免疫共沉淀（ChIP）实验验证MYOCD的动态变化对SMAD3介导的Snail的转录调控及SMAD3和SMAD4对TGF-β诱导的MYOCD的转录调控。研究结果:1、TGF-β诱导NSCLC细胞EMT过程中MYOCD的表达上调。2、敲低MYOCD抑制TGF-β诱导的A549和H1650细胞EMT和迁移及侵袭。3、过表达MYOCD促进TGF-β诱导的A549和H1650细胞EMT和迁移及侵袭。4、过表达MYOCD促进A549细胞在裸鼠体内的转移。5、MYOCD通过结合SMAD3增强TGF-β/SMAD3信号通路的活性。6、MYOCD促进TGF-β诱导的SMAD3/SMAD4复合物的入核。7、敲低MYOCD抑制TGF-β诱导的p-SMAD3与Snail启动子的结合。8、MYOCD在发生淋巴结转移和远端转移的NSCLC组织样本中高表达且与Snail的表达呈正相关。9、TGF-β诱导NSCLC中SMAD3/SMAD4复合物转录激活MYOCD的表达。研究结论:在本研究中我们揭示了 MYOCD通过影响SMAD3与Snail启动子区的结合调控Snail的表达继而影响NSCLC细胞的EMT与侵袭和迁移。在淋巴结转移和远端转移的NSCLC组织样本中MYOCD呈高表达且MYOCD与Snail的表达显著正相关。最后,我们在NSCLC中发现了 TGF-β诱导的EMT与MYOCD之间的正反馈调控作用。本研究加深了我们对TGF-β诱导的NSCLC转移的机制的了解,为通过阻断TGF-β信号通路而干预NSCLC转移提供了新的思路和方法。