论文部分内容阅读
本文以低温脱脂豆粕为原料,首先利用等电点法提取大豆球蛋白,将大豆球蛋白经葡聚糖凝胶层析纯化,然后再从纯化的大豆球蛋白中提取大豆球蛋白碱性多肽(SGBP),通过单因素实验和正交实验研究提取大豆球蛋白碱性多肽的最优提取条件,得到试验需要的SGBP。然后用提取的SGBP研究其对金黄色葡萄球菌的抑菌活性和抑菌机理。主要实验结果如下:(1)根据等电点沉淀原理,研究从低温脱脂豆粕中提取大豆球蛋白。分别将大豆球蛋白提取液的pH调为6.0,6.2,6.4,6.6和6.8进行冷却沉淀,采用Sephadex G150进行纯化,得出提取大豆球蛋白最佳pH值为6.4。(2)采用纯化后的大豆球蛋白提取SGBP。利用β-巯基乙醇使连接大豆球蛋白酸性多肽和碱性多肽的二硫键断开,根据酸性多肽和碱性多肽等电点的不同分离纯化SGBP。研究料液比,水浴温度,水浴时间和pH对SGBP提取条件的影响。设计正交实验分析SGBP的最优提取条件。由单因素试验得出:最佳料液比为1:25;最佳提取温度为70°C;最优提取时间为45min;最佳提取pH为8.25。由正交试验和验证试验得出:最优的试验组合为提取温度为70°C,提取时间为30min,提取液的pH为8.25。(3)采用牛津杯实验和分光光度法检测SGBP对金黄色葡萄球菌抑菌活性和最小抑菌浓度。采用菌落计数法研究SGBP对金黄色葡萄球菌的动力学的研究,实验结果表明:SGBP的最小抑菌浓度为50μɡ/ml,最佳抑菌浓度为200μɡ/ml;而且SGBP对金黄色葡萄球菌的抑菌效果随着作用时间和浓度的增加而增强。(4)通过吸光度法测定SGBP处理后的金黄色葡萄球菌细胞壁的变化,结果表明:对比实验组(用SGBP处理)与阴性对照组(用磷酸盐缓冲液处理)的OD630没有显著差别,说明SGBP对金黄色葡萄球菌的细胞壁没有作用;通过结晶紫实验,电导率和离子泄漏分析测定SGBP对金黄色葡萄球菌细胞膜通透性的影响,结果表明:结晶紫实验中,随着浓度的增大,OD590也随之增大;随着处理时间的增长,电导率随之增大,离子泄漏随之增多,说明SGBP可以作用于金黄色葡萄球菌的细胞膜,能够改变其通透性。通过将提取SGBP与金黄色葡萄球菌作用后,提取金黄色葡萄球菌的DNA,观察到用SGBP处理后的和空白对照组相比较,DNA条带的出现变暗、拖尾的现象,说明SGBP能够作用于金黄色的葡萄球菌的遗传物质DNA。