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小鼠诺瓦克病毒(Murine Noroviruses,MNV)属于杯状病毒科,诺如病毒属,在实验小鼠中的自然感染率很高,最初是在免疫缺陷小鼠内发现的。感染MNV后,免疫功能正常的小鼠通常无明显症状,而免疫缺陷小鼠可以出现致死性感染。MNV具有遗传和抗原多样性,容易发生变异,我国关于MNV的报道还比较少,对其致病力及对实验研究的影响尚不完全清楚,也没有明确的感染情况调查。为了解上海地区实验小鼠自然感染MNV的状况,本实验抽取委托检测单位送检的319只SPF级实验小鼠,分别采集盲肠内容物和血清样本,应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法扩增小鼠盲肠内容物样本中MNV的特异性基因片段来检测MNV的感染状况,同时采用酶联免疫吸附试验(Enzyme linked immunosorbent assay, ELIS A)与核酸检测方法进行对比。MNV可以在小鼠巨噬细胞系RAW264.7细胞内进行复制,并能产生细胞病变效应(Cytopathic effectCPE),利用这个特性,可以将RT-PCR检测结果为阳性的盲肠内容物样本稀释后经0.221μm滤膜过滤,将滤液接种到RAW264.7细胞分离病毒,盲传后采用RT-PCR方法鉴定.MNV是RNA病毒,基因组含有四个开放阅读框(Open reading frames, ORFs),其中的ORF2编码衣壳蛋白VPI,而目前关于MNV的研究多与VP1有关,根据GenBank中登陆的国内广州株序列设计相关引物,扩增分离毒株的ORF2,并进行克隆、原核表达,观察是否有诱导蛋白产生。经RT-PCR检测的319份小鼠盲肠内容物样本中,阳性样本95份,阳性率为29.78%。对180份经RT-PCR检测的小鼠的血清样本进行ELISA检测,阳性样本70份,阳性率为38.89%。AW264.7细胞盲传5代后在24h内出现CPE,72h内病变逐渐明显,细胞培养物经RT-PCR鉴定,凝胶电泳得到一条187bp的目的条带,测序结果与样本来源一致。经RT-PCR扩增得到分离毒株的ORF2片段,测序结果为1626bp,经NCBI的BLAST软件分析,与登录的MNV毒株同源性在87%以上。为得到大量稳定的目的片段,将ORF2克隆到pMD-18T载体。目的质粒与表达载体pET28a双酶切后连接,将重组质粒pET28a-ORF2转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导蛋白表达、镍琼脂糖亲和层析和阴离子交换层析分离纯化目的蛋白,通过SDS-PAGE电泳判断目的蛋白分子质量约60 KD。本实验通过核酸检测方法和血清学方法证实上海地区实验小鼠存在MNV自然感染,且感染率较高,利用细胞培养分离到阳性毒株,并对分离毒株的ORF2进行了原核表达,小鼠作为常用的实验动物,应该严格控制其质量,避免小鼠本身存在的病原体干扰实验结果,所以应加强实验小鼠的饲养管理。