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目的:确定TANK结合激酶1（TANK-binding kinase 1,TBK1）如何通过介导受体相互作用蛋白激酶3（Receptor-interacting protein kinase 3,RIPK3）的磷酸化来参与谷氨酰胺的分解代谢以促进巨噬细胞内毒素耐受。方法:提取小鼠库普弗细胞（Kuppfer cells,KCs）,建立内毒素耐受模型,即用小剂量（10 ng/ml）脂多糖（Lipopolysacchairde,LPS）刺激KCs 24 h后,再用大剂量（1000 ng/ml）LPS刺激12 h。同时建立KCs非耐受模型,即KCs培养24 h后,直接用大剂量（1000ng/ml）LPS刺激12 h。收集上述细胞模型,进行以下检测:（1）Western blotting检测TBK1、p-TBK1、i NOS（Inducible nitric oxide synthase,i NOS）、TNF-α（Tumor nercrosis factor-α,TNF-α）、RIPK3、p-RIPK3、GLUD1（Glutamate dehydrogenase 1,GLUD1）、NF-κB（Nuclear factor-kappa B,NF-κB）和p-NF-κB蛋白表达水平;（2）ELISA检测细胞上清TNF-α和IL-10（Interleukin10,IL-10）的含量;（3）激光共聚焦观察KCs内p-TBK1的分布情况。si RNA转染RAW264.7细胞敲低Tbk1和Ripk3基因表达后检测耐受组相关蛋白情况。利用缺陷慢病毒过表达巨噬细胞中Tbk1和Ripk3表达,研究过表达Tbk1及Ripk3基因对GLUD1、α-KG以及内毒素耐受的影响。建立小鼠内毒素耐受模型,观测小鼠的生存率并收集外周血和肝脏组织进行以下检测:（1）H＆E染色观察小鼠肝脏组织炎症情况;（2）ELISA检测血清TNF-α和IL-10的含量,检测小鼠血清AST、ALT水平,了解小鼠肝功能状况;（3）免疫组织化学检测小鼠中GLUD1的表达情况;（4）收集小鼠肝脏,提取蛋白,western blot检测TBK1、p-TBK1、RIPK3、p-RIPK3、GLUD1、TNF-α及i NOS的蛋白表达水平;（5）分光光度法检测小鼠肝脏及血清中GLUD1的酶活性。使用氯膦酸二钠脂质体清除小鼠体内巨噬细胞后再检测上述指标。结果:在建立小鼠经典内毒素耐受模型后,结果显示ET组小鼠肝脏TBK1磷酸化水平明显高于NET组（NET:1.594±0.5797,ET:2.469±1.455,N=3,P＜0.05）,ET组小鼠血清AST（NET:2.233±1.754,ET:1.205±0.7267,N=3,P＜0.05）和ALT水平（NET:1.821±0.692,ET:1.263±0.1335,N=3,P＜0.05）均下降。除此之外ET组小鼠血清IL-10水平升高（NET:426.8±7.424,ET:503.2±68.99,N=3,P＜0.05）,而TNF-α水平降低（NET:480.9±71.57,ET:418.7±9.314,N=3,P＜0.05）。提取小鼠KCs,建立体外内毒素耐受、非耐受模型后,与体内模型结果一致,ET组磷酸化TBK1水平明显高于NET组（NET:0.5643±0.2924,ET:0.804±0.532,N=3,P＜0.05）,通过si RNA成功敲低Tbk1后,TBK1诱导内毒素耐受的作用减弱,RIPK3磷酸化水平下降（ET:0.636±0.2583,TBK1-si RNA-ET:0.1756±0.0202,N=3,P＜0.05）,GLUD1酶活性下降（ET:0.2358±0.0457,TBK1-si RNA-ET:0.2237±0.0336,N=3,P＜0.05）,α-KG产量降低（ET:7.59±0.7386,TBK1-si RNA-ET:7.263±0.4119,N=3,P＜0.05）,耐受组促炎因子表达增加。而在慢病毒过表达TBK1后,TBK1诱导内毒素耐受的作用增强,RIPK3磷酸化水平升高（ET:0.1407±0.0684,LV-TBK1-OE+ET:0.2582±0.1859,N=3,P＜0.05）,GLUD1酶活性增~1高（ET:0.2265±0.0364,LV-TBK1-OE+ET:0.6439±0.4538,N=3,P＜0.05）,产生α-KG增多（ET:7.325±0.4877,LV-TBK1-OE+ET:7.888±1.051,N=3,P＜0.05）,耐受组促炎因子表达降低。活化的RIPK3可以直接与GLUD1结合,从而提高其催化活性并增加巨噬细胞中α-KG的产生。谷氨酰胺分解产生的α-KG限制巨噬细胞的M1型极化以诱导内毒素耐受。通过流式细胞术评估细胞表面标志物CD86和F4/80来确定M1/M2巨噬细胞的分化比例。这些发现揭示了炎症代谢控制和通过调节谷氨酰胺代谢诱导内毒素耐受的新机制。结论:由于巨噬细胞的诱导分型受到谷氨酰胺代谢的调节,TBK1可以通过调节RIPK3的磷酸化参与到谷氨酰胺代谢中从而增强巨噬细胞对内毒素的耐受性。