阿胶作为传统中药在中国已经有两千多年的应用历史。由于对于阿胶原料的驴皮的蛋白组成等基本问题研究不足,阿胶的药理功能机制迄今未得到的清晰的阐明。为此,本论文从阿胶原材料驴皮出发,分析驴真皮中的主要组成蛋白,并在此基础上探讨阿胶的有关作用机理。 首先,分别采用TriPure试剂法和SDS法提取驴真皮中的总蛋白,SDS—PAGE和氨基酸序列分析的结果表明,驴真皮中不仅含有I型胶原蛋白,而且还含有大量的驴血清白蛋白(DkSA)。毛细管色谱分析表明,驴皮中的胶原蛋白与DkSA存在着结合现象。上述结果首次证明现DkSA是驴真皮中的一个主要成分。 因此,阿胶除了含有I型胶原蛋白及其水解产物,也必然含有DkSA及其水解产物。从结构的复杂性和功能的广泛性推测,DkSA在阿胶广泛的药理作用中可能扮演着重要的角色。 基于DkSA在体内可以相互流动并处于动态平衡,选择了来源丰富并含有大量血清白蛋白的驴血浆作为分离纯化DkSA的原材料。由新鲜驴血浆离心得到的血清经冷冻,离心,透析,0.22 μm滤膜过滤除菌,经过两步的Source 15Q强阴离子交换色谱于HPLC进行分离纯化,得到三个含有DkSA的组分,经cLC、SDS—PAGE、PAGE电泳鉴定,均为单一组分。SDS—PAGE电泳测的其分子量为66.OkDa。最后对分离纯化的DkSA于60℃水浴加热10小时进行病毒灭活处理。 基于阿胶对骨质疏松症有一定治疗疗效,对DkSA促大鼠成骨样细胞(UMR一106)增殖活性进行了研究。结果表明,不同浓度下DkSA促UMR一细胞增殖作用都非常明显,浓度为0.03mg/m1时,最高增殖率为87.31%。由于I型胶原蛋白具有抑制成骨细胞的增殖和促进其分化的功能,因此阿胶对骨质疏松症的治疗可能源自于I型胶原蛋白和DkSA对成骨细胞增殖分化的协同作用。 基于阿胶对血管有舒张作用,具有潜在降低血压的功能,对DkSA胰蛋白酶酶解产物的ACE活性进行了研究。结果表明,其酶解产物具有良好的ACE抑制活性。根据生物信息学软件模拟胰酶降解DkSA得到的多肽片断,推测酶解产物可能含有的7肽YLYEVAR具有潜在抑制ACE活性的功能。 综上所述,本论文为阿胶研究提供了新视角,基于驴皮蛋白组成的深入研究及其相关蛋白所衍生的生物活性肽的研究将有助于阐明阿胶的药理作用机制,为深度开发祖国传统医药提供借鉴。