小鼠皮层神经细胞原代培养的形态学观察及不同浓度谷氨酸对皮层神经细胞内钙的影响

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为了探讨鼠皮层神经细胞的形态学变化规律,以及兴奋性氨基酸对皮层神经细胞的兴奋性毒性作用机理,该研究建立了小鼠胚胎皮层神经细胞体外原代培养的模型,连续6周利用免疫细胞化学技术的ABC染色法对神经元特异性烯醇化酶(NSE)进行标记,对NSE阳性细胞进行形态学方面的指标测定,同时利用钙的荧光指示剂Fluo-3/AM,在不同浓度谷氨酸对神经细胞进行不同时程的刺激后,记录神经细胞胞内钙的变化.结果表明:1、皮层神经细胞原代培养的第2周是神经细胞生长发育最旺盛时期.细胞已从第1周形成的聚集丛的中心向四周迁移,细胞直径变大(图5),胞体从圆形发育成锥形、棱形、多边形等,突起的发育达到峰值(P<0.05).2、谷氨酸是中枢神经系统重要的神经递质,过量的Glu可对神经细胞产生兴奋性毒性而导致Ca<2+>向细胞内流动,而Ca<2+>内流的量以及对细胞产生损伤程度在一定范围内与Glu的剂量及接触时间存在依赖性.相对低浓度的Glu(100μM)可诱导皮层神经细胞凋亡.3、体外神经细胞培养的方法可以用来观察和研究哺乳动物单个神经细胞,适合作单因子分析,也可给众多的处理因素模拟各种病理环境进行多方面机制的研究.这是在细胞和膜水平进行神经生物学研究的有效模型.
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