【摘 要】
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研究背景:在世界范围内胃癌是死亡率第三位的恶性肿瘤,中国是胃癌发病率最高的国家之一,其死亡率在恶性肿瘤中位居第三位,对人类生命和健康构成严重威胁。神经轴突导向因子-1（Netrin-1）在神经系统中的功能已经被广泛研究,它有诱导神经分化,促进神经纤维定向迁移等功能。近年来大家对Netrin-1在肿瘤发生发展过程中的作用越来越重视,有研究报道Netrin-1在多种恶性肿瘤中高表达,并且和肿瘤的生长、
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研究背景:在世界范围内胃癌是死亡率第三位的恶性肿瘤,中国是胃癌发病率最高的国家之一,其死亡率在恶性肿瘤中位居第三位,对人类生命和健康构成严重威胁。神经轴突导向因子-1（Netrin-1）在神经系统中的功能已经被广泛研究,它有诱导神经分化,促进神经纤维定向迁移等功能。近年来大家对Netrin-1在肿瘤发生发展过程中的作用越来越重视,有研究报道Netrin-1在多种恶性肿瘤中高表达,并且和肿瘤的生长、侵袭、血管再生和转移相关。但是,Netrin-1在胃癌发生发展过程的作用及生物学功能还没有研究。本研究将利用临床标本分析,细胞/动物实验研究Netrin-1在胃癌发展过程中的生物学功能,并利用分子生物学技术探讨Netrin-1发挥生物学作用的具体分子机制。方法:利用胃癌临床标本,通过RT-PCR和免疫组化分析Netrin-1表达量同胃癌患者临床病理资料之间的关系。采用转染慢病毒的方法,分别过表达/干扰胃癌细胞株Netrin-1的表达水平后,通过CCK-8、平板克隆形成实验、划痕实验、Transwell实验检测分析Netrin-1对于胃癌细胞增殖与侵袭转移能力的影响,同时通过小鼠皮下移植瘤模型和尾静脉转移瘤模型在体内环境下验证上述研究结果。随后我们对Netrin-1发挥其生物学作用所依赖的分子机制进行研究,通过检测Netrin-1各个受体表达,并利用siRNA抑制相关受体表达,分析Netrin-1发挥作用的主要受体。随后分别加入FAK和PI3K抑制剂分析FAK/PI3K/AKT信号通路是否是Netrin-1发挥胞内作用的主要信号通路,并进行相关细胞功能学实验进行验证。结果:通过胃癌临床标本分析我们发现Netrin-1表达量同胃癌的淋巴结转移,临床分期呈正相关。CCK-8实验及平板克隆形成实验发现Netrin-1增强胃癌细胞的增殖能力;划痕实验和Transwell实验发现Netrin-1增强胃癌细胞的迁移及侵袭能力。小鼠皮下移植瘤模型发现Netrin-1干扰组的小鼠瘤体积减小,生长曲线放缓;小鼠尾静脉转移瘤模型发现Netrin-1干扰组肿瘤远处转移机率比正常对照组低。RT-PCR分析Netrin-1各个受体表达情况,发现neogenin表达量最高,并且Netrin-1主要通过其受体neogenin促进胃癌细胞的增殖和侵袭。Western blotting分析结果显示Netrin-1可以增强FAK,AKT及MMP-9等信号分子表达,通过加入抑制剂及功能实验发现FAK/PI3K/AKT信号通路介导了Netrin-1促进胃癌的生长和转移作用。结论:Netrin-1在胃癌组织中表达较高,并且和淋巴结转移、临床分期呈正相关。体内及体外实验证明Netrin-1可以促进胃癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力。Neogenin在Netrin-1所有受体中表达量最高,而且Netrin-1主要通过其受体neogenin促进胃癌细胞的增殖和侵袭能力,分子生物学实验表明FAK/PI3K/AKT信号通路介导Netrin-1促进胃癌的生长和转移能力。
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