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目的:探讨Rap1GAP第11和19外显子在人浸润性乳腺癌中的缺失情况,以及Rap1GAP、MMP2和MMP9蛋白在浸润性乳腺癌组织中表达情况,并分析上述指标在浸润性乳腺癌中的相关性,以期为揭示乳腺癌的发生发展的分子生物学机制提供理论基础。乳腺癌是乳腺导管上皮细胞的恶性肿瘤,是妇女的常见恶性肿瘤。全球每年约有100万名女性被诊断为乳腺癌,且每年乳腺癌发病率以5%-20%的速度发展。在我国,乳腺癌的发病率仅次于宫颈癌位居第二位。肿瘤的发生发展是一个多因素、多阶段的过程,是以多种原癌基因的激活和抑癌基因的失活为基础的复杂过程。Rap1GAP ( Rap1 GTPase-activating protein 1)作为新发现的抑癌蛋白与多种肿瘤的发生发展具有密切关系。Rap1GAP是小G蛋白Rap1特异的GTP酶活化蛋白,催化Rap1从有活性的GTP结合形式转变成无活性的GDP结合形式,从而调节细胞的生长、增值、粘附等生物功能。本科研组前期研究显示,Rap1GAP能够抑制宫颈癌Hela细胞系的增殖、迁移和侵袭,初步研究显示Rap1GAP通过抑制MMP2和MMP9的活性抑制Hela的迁移和侵袭。宫颈癌与乳腺癌是女性疾病两大杀手,多种基因在两种癌组织中存在共同的变化规律。为此本文将探讨在乳腺疾病中Rap1GAP的基因缺失及蛋白表达,并探讨在浸润性乳腺导管癌中Rap1GAP、MMP2、MMP9的改变及相关性。方法:53例乳腺组织标本来自大连市中心医院病理中心2008年乳腺手术送检石蜡包埋组织,所有标本均经病理确诊。其中正常乳腺组织10例、乳腺小叶增生组织17例、浸润性乳腺导管癌组织26例。DNA标本采用试剂盒从石蜡包埋组织切片中提取。PCR方法对提取的乳腺组织DNA标本进行Rap1GAP外显子E11、外显子E19扩增,琼脂糖凝胶电泳检测在浸润性导管癌中Rap1GAP部分外显子的纯合性缺失情况。免疫组织化学染色S-P法检测正常乳腺组织、乳腺小叶增生组织和浸润性乳腺导管癌组织中Rap1GAP、MMP2、MMP9的蛋白表达情况。统计学分析Rap1GAP第11和19外显子在人浸润性乳腺癌中的缺失情况,以及Rap1GAP、MMP2和MMP9蛋白在浸润性乳腺癌组织中表达情况,并分析上述指标的相关性。结果:1. Rap1GAP E11外显子在正常乳腺组织、乳腺小叶增生组织和浸润性乳腺导管癌组织中的缺失率分别为:10%(1/10)、11.76%(2/17)、19.23%(5/26)。Rap1GAP E19外显子在正常乳腺组织、乳腺小叶增生组织和浸润性乳腺导管癌组织中的缺失率分别为:20%(2/10)、11.76%(2/17)、19.23%( 5/26)。E11和E19外显子缺失率在三组之间无显著性差异(p>0.05)。2. Rap1GAP在正常乳腺组织、乳腺小叶增生组织及浸润性乳腺导管癌组织中表达的阳性率分别为:80%(8/10)、52.94%(9/17)、30.77%(8/26)。浸润性乳腺导管癌组织Rap1GAP表达阳性率明显低于乳腺小叶增生组织(p<0.05)和正常乳腺组织(p<0.05);乳腺小叶增生组织中Rap1GAP表达阳性率明显低于正常乳腺组织(p<0.05)。3. MMP2在正常乳腺组织、乳腺小叶增生组织及浸润性乳腺导管癌组织中表达的阳性率分别为:20%(2/10)、23.53%(4/17)、53.85%(14/26)。浸润性乳腺导管癌组织MMP2表达阳性率明显高于乳腺小叶增生组织(p<0.05)和正常乳腺组织(p<0.05);在乳腺小叶增生组织和正常乳腺组织中MMP2表达阳性率无明显差异(p>0.05)。4. MMP9在正常乳腺组织、乳腺小叶增生组织及浸润性乳腺导管癌组织中表达的阳性率分别为:10%(1/10)、23.53%(4/17)、57.69%(14/26)。浸润性乳腺导管癌组织MMP9表达阳性率明显高于乳腺小叶增生组织(p<0.05)和正常乳腺组织(p<0.05);乳腺小叶增生组织中MMP9表达阳性率明显高于正常乳腺组织(p<0.05)。5. Spearman相关分析5.1 Rap1GAP外显子E11缺失与Rap1GAP蛋白阳性表达之间无相关性(p>0.05);Rap1GAP外显子E19缺失与Rap1GAP蛋白阳性表达之间无相关性(p>0.05)。5.2在乳腺小叶增生组织及浸润性乳腺导管癌组织中,Rap1GAP与MMP2蛋白的阳性表达均呈负相关(p<0.05);两组中Rap1GAP与MMP9蛋白的阳性表达亦均呈负相关(p<0.05);而MMP2与MMP9蛋白的阳性表达在两组中无相关性(p>0.05)。结论:1. Rap1GAP基因外显子E11和E19缺失率在正常乳腺组织、乳腺小叶增生和乳腺浸润性导管癌组织中无显著差异。2. Rap1GAP蛋白表达阳性率在浸润性乳腺导管癌组织明显低于乳腺小叶增生组织及正常乳腺组织;乳腺小叶增生组织中Rap1GAP蛋白表达阳性率与正常乳腺组织比较明显降低。3.浸润性乳腺导管癌中MMP2、MMP9蛋白表达阳性率明显高于乳腺小叶增生组织及正常乳腺组织,乳腺小叶增生组织又高于乳腺正常组织。4.在乳腺小叶增生组织及浸润性乳腺导管癌组织中Rap1GAP表达均下调,而MMP2、MMP9表达均上调,呈负相关。5.在乳腺小叶增生组织及浸润性乳腺导管癌组织中,基因缺失可能不是引起Rap1GAP表达下调的主要原因。