【摘 要】
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目的探讨NES1基因在前列腺癌中的功能作用。方法通过免疫组化检测临床40例前列腺癌患者肿瘤NES1蛋白的表达情况,并与该40例患者的癌旁正常组织及20例良性前列腺增生症患者的增生组织进行比较;分析前列腺癌组织NES1蛋白表达与前列腺癌肿瘤Gleason评分病理分级及血清前列腺特异性抗原指标等临床评价指标的关系;分析NES1蛋白表达与骨转移发生的相关性;并通过实时荧光定量PCR及蛋白免疫印迹法验证前
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目的探讨NES1基因在前列腺癌中的功能作用。方法通过免疫组化检测临床40例前列腺癌患者肿瘤NES1蛋白的表达情况,并与该40例患者的癌旁正常组织及20例良性前列腺增生症患者的增生组织进行比较;分析前列腺癌组织NES1蛋白表达与前列腺癌肿瘤Gleason评分病理分级及血清前列腺特异性抗原指标等临床评价指标的关系;分析NES1蛋白表达与骨转移发生的相关性;并通过实时荧光定量PCR及蛋白免疫印迹法验证前列腺癌细胞株NES1 mRNA及蛋白的表达,并与前列腺正常上皮细胞的NES1表达情况进行比较。通过构建重组慢病毒载体pLVX-NES1-IRES-ZsGreen1将NES1基因导入低表达的前列腺癌细胞株LNCaP和PC-3,上调NES1的表达,通过流式细胞术分选得到高纯度稳定表达NES1的LNCaP-NES1和PC-3-NES1后,通过细胞水平的增殖、凋亡、迁移和侵袭实验,以及裸鼠移植瘤的体内增殖实验,研究NES1基因在雄激素依赖和非依赖前列腺癌中的功能作用,并通过18F-FLT小动物PET/CT肿瘤增殖显像和18F-FDG小动物PET/CT肿瘤代谢显像评价两组移植瘤增殖和糖代谢的差异,最后与裸鼠移植瘤NES1、Ki-67、bcl-2、bax蛋白表达的免疫组化结果进行比较,初步研究NES1基因在前列腺癌中的作用机制。结果（1）NES1蛋白在前列腺癌肿瘤组织中低表达,在癌旁正常组织正常表达,在良性前列腺增生组织中高表达;在前列腺癌细胞系（PC-3、DU-145和LNCaP）中NES1表达明显低于前列腺正常上皮细胞株RWPE-1。（2）前列腺癌肿瘤组织的NES1蛋白表达与前列腺癌组织病理Gleason分级、骨转移的发生与否以及临床血清PSA相关指标均无明显相关性。（3）Realtime PCR和Western Blot方法验证成功构建稳定过表达NES1的前列腺癌细胞株LNCaP-NES1和PC-3-NES1。（4）NES1基因在雄激素依赖前列腺癌细胞株LNCaP中,没有明显的抑制细胞增殖、促进细胞凋亡、以及具有统计学差异的抑制细胞迁移的作用,仅有轻度抑制细胞侵袭的功能;而在雄激素非依赖的前列腺癌细胞株PC-3中,NES1基因具有抑制肿瘤细胞增殖、促进细胞早期凋亡、抑制迁移和侵袭的作用。（5）在PC-3-NES1荷瘤裸鼠体内,大体实验和18F-FLT小动物PET/CT全身显像均显示NES1基因能抑制肿瘤增殖,18F-FDG小动物PET/CT全身显像显示NES1基因能抑制肿瘤的糖代谢,移植瘤免疫组化提示NES1基因增高,伴随Ki-67表达下降,bcl-2表达下降,bax表达轻度增高,bcl-2/bax比值明显下降。结论NES1基因在雄激素非依赖前列腺癌中可能通过抑制细胞增殖、迁移和侵袭,促进细胞发生早期凋亡而起到抑制肿瘤的作用。
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