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人类免疫缺陷病毒1型（Human Immunodeficiency Virus Type1，HIV-1）与丙型肝炎病毒（Hepatitis C Virus，HCV）合并感染的临床治疗和相关致病机制研究是目前临床面临的难题和研究热点。由于HIV-1和HCV的传播途径相同，均通过血液及血液制品、性途径、母婴途径传播，HIV-1/HCV合并感染的现象非常普遍。随着高效抗逆转录病毒治疗(Highly Active Anti-RetroviralTherapy,HAART)在艾滋病中的广泛和规范应用，机会性感染的发病率和死亡率都已显著下降，而合并HCV感染所致的肝损害已经成为艾滋病患者死亡的主要原因之一；抗HCV治疗的低有效率和HAART治疗中不良反应的增加；中国国内流行的HCV基因型及准种复杂而又难治，这些都使得对HIV-1/HCV合并感染者的治疗更加棘手。但究其原因，至今并不完全明了，很有必要从病毒学和免疫学角度对HIV-1/HCV合并感染者进行深入研究。既往很多研究已证实细胞因子在HIV-1感染疾病进展过程中发挥了重要的作用，有研究表明：在HIV-1感染过程中IL-4可抑制体内的病毒水平，IL-7对维持淋巴细胞的存活发挥了重要的作用，IL-17可能参与HIV-1病毒的免疫反应，IL-21可以促使CD8+T细胞增殖及保持活性，IFN-γ是机体免疫系统抵抗病毒感染的重要细胞因子之一。我们推测合并HCV感染会对HIV-1感染者上述细胞因子产生影响，而有关HCV合并感染对HIV-1感染者上述细胞因子的影响阐述得并不多，所以有必要对HCV合并感染对HIV-1感染者上述细胞因子的分泌状况展开研究。既往有关HIV-1感染和HCV感染的特异性细胞免疫应答的研究，结果均提示特异性CTL反应对HIV-1感染和HCV感染的控制均具有重要作用，国内外也有少部分关于HIV-1/HCV合并感染者的特异性细胞免疫应答的研究报道。但由于地域和种族的差异，有必要对华南地区HIV-1/HCV合并感染者的特异性细胞免疫应答进行研究。前期我们用ELISPOT方法检测HIV-1感染者的CD8+T细胞对HIV-1合成表位的免疫主导应答发现：HIV-1Gag区域肽段诱导产生的CD8+T细胞的IFNγ分泌细胞频率最高。故我们选用HIV-1P24区域（Gag133~191）的氨基酸序列人工合成的12个重叠肽段组成的肽段库作为特异性肽段表位，对HIV-1/HCV合并感染者和HIV-1感染者的HIV-1特异性CTL应答进行研究。实验一HIV-1单纯及合并HCV感染的CD4+T细胞、CD8+T细胞及PBMC内IL-7、IL-21、IFN-γmRNA水平测定实验对象：以中国华南地区的已HAART治疗的25例HIV-1单纯感染和22例HIV-1/HCV合并感染者，及20例健康对照者为研究对象。实验方法：分别采用免疫磁珠分选技术、实时荧光定量PCR方法，以上述HIV-1P24区域重叠肽段库作为HIV-1特异性肽段表位，刺激从上述三组研究对象的外周血单个核细胞（PBMC）分选出的CD4+T淋巴细胞，CD8+T淋巴细胞，分别检测CD4+T淋巴细胞、CD8+T淋巴细胞及PBMC在刺激前后IL-7、IL-21、IFN-γ，β-actin的mRNA水平，统计IL-7、IL-21、IFN-γ与β-actin的比值，并用单因素方差分析方法进行统计分析。实验结果：已接受HAART治疗的HIV-1单纯感染组和HIV-1/HCV合并感染组及健康对照组细胞内IFN-γ、IL-7、IL-21的mRNA水平比较P24抗原表位刺激培养后，HIV-1单纯感染组CD8+T细胞的IFN-γ mRNA水平明显高于CD4+T细胞（P<0.05）。无论有无P24特异性抗原表位刺激，健康对照组PBMC中IFN-γ的mRNA水平均明显高于HIV-1单纯感染组和HIV-1/HCV合并感染组（P<0.05）； P24抗原表位刺激后，HIV-1/HCV合并感染组PBMC中IL-7mRNA水平明显高于HIV-1单纯感染组（P<0.05）；无论有无P24特异性抗原表位刺激，各组PBMC中IL-21mRNA水平相比均无明显差异（P>0.05）。实验二ICS检测HIV-1单纯及合并HCV感染者分泌IL-4，IL-17A，IL-21，IL-21R，IFN-γ的CD3+T淋巴细胞比例实验对象：以未HAART治疗的24例HIV-1单纯感染者和21例HIV-1/HCV合并感染者，及20例健康对照组为研究对象。实验方法：采用细胞内细胞因子染色法（intra-cellular CK staining，ICS），以上述HIV-1P24区域重叠肽段库作为特异性肽段表位，刺激上述研究对象的PBMC，检测使用与未使用P24抗原表位刺激后细胞内分泌IL-4、IL-17A、IL-21、IL-21R、IFN-γ的CD3+T淋巴细胞比例，并用单因素方差分析方法进行统计分析。实验结果：未接受HAART治疗的HIV-1单纯感染组和HIV-1/HCV合并感染组及健康对照组细胞内分泌IL-4、IL-17A、IFN-γ、IL-21、IL-21R的T淋巴细胞比例比较比较使用与未使用P24抗原表位刺激后的结果显示，三组T淋巴细胞内的分泌IL-4、IL-17A、IFN-γ、IL-21、IL-21R的比例变化不显著（P>0.05）。在无P24抗原表位刺激培养后，HIV-1单纯感染组的CD3+IL-4+/T淋巴细胞明显高于健康对照组（P<0.05），HIV-1/HCV合并感染组CD3+IL-4+/T淋巴细胞也高于健康对照组，但差异不显著（P>0.05）；而在P24抗原表位刺激培养后，三组CD3+IL4+/T淋巴细胞差异不显著（P>0.05）。无论有无P24抗原表位刺激培养，HIV-1单纯感染组CD3+IL17-A+/T淋巴细胞>HIV-1/HCV合并感染组>健康对照组，且HIV-1单纯感染组明显高于其他两组（P<0.05）； HIV-1单纯感染组CD3+IFN-γ+/T淋巴细胞> HIV-1/HCV合并感染组>健康对照组，三组差异不显著（P>0.05）；三组CD3+IL-21+/T淋巴细胞差异不显著（P>0.05）；HIV-1单纯感染组CD3+IL-21R+/T淋巴细胞比例>健康对照组> HIV-1/HCV合并感染组，HIV-1单纯感染组明显高于其他两组（P<0.001）。实验三ELISPOT检测HIV-1单纯及合并HCV感染的HIV-1特异性细胞免疫应答实验对象：以上述实验一和实验二中的单纯感染者和合并感染者为研究对象。实验方法：采用酶联免疫斑点吸附技术（enzyme-linked immunosorbent spot，ELISPOT），以上述HIV-1P24区域重叠肽段库作为特异性肽段表位，分别检测研究对象PBMC中HIV-1特异性CTL应答频数，并用卡方检验方法进行统计分析。分析合并HCV感染对HIV-1感染细胞免疫的影响，HAART对HIV-1感染细胞免疫的影响。实验结果：HIV-1单纯感染组和HIV-1/HCV合并感染组HIV-1特异性CTL应答比较已接受HAART治疗HIV-1单纯感染组HIV-1特异性细胞免疫应答率（13/25）明显高于HIV-1/HCV合并感染组（5/22）（P<0.05）；未接受HAART治疗HIV-1单纯感染组HIV-1特异性细胞免疫应答率（8/22）高于HIV-1/HCV合并感染组（6/21），但差异不显著（P>0.05）；已治疗单纯感染组的HIV-1特异性细胞免疫应答率（13/25）高于未治疗单纯感染组（8/22），但差异不显著（P>0.05）；已治疗合并感染组HIV-1特异性细胞免疫应答率（5/22）与未治疗合并感染组（6/21）的相比无明显差异（P>0.05）。结论：1.合并HCV感染可能使HIV-1感染者HIV-1特异性细胞免疫应答水平下降，这可能是HIV-1/HCV合并感染者HAART治疗疗效差的原因之一。2.细胞因子IL-7、IL-17、IL-21R在HIV-1特异性细胞免疫中发挥重要作用。HIV-1感染还可以通过Th17和Tfh途径影响感染者的细胞免疫，而HCV合并感染会对此产生干扰；IL-7在HIV-1/HCV合并感染者的细胞免疫中起重要作用。