【摘 要】
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猪由于与人类的生理相似性而被用作研究器官异种移植和人类疾病的动物模型。IVP胚胎在胚胎发育和生殖技术的研究中起着重要的作用。但是,许多不利的环境因素导致卵母细胞的质量在体外低于体内。主要原因可能是,与体内成熟的卵母细胞相比,IVM卵母细胞易受光,氧胁迫和培养基成份的影响,从而改变了卵母细胞的代谢并导致ROS的产生和降解失衡。猪卵母细胞含有大量脂质,这些脂质对ROS特别敏感。过量的ROS可能会导致脂
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猪由于与人类的生理相似性而被用作研究器官异种移植和人类疾病的动物模型。IVP胚胎在胚胎发育和生殖技术的研究中起着重要的作用。但是,许多不利的环境因素导致卵母细胞的质量在体外低于体内。主要原因可能是,与体内成熟的卵母细胞相比,IVM卵母细胞易受光,氧胁迫和培养基成份的影响,从而改变了卵母细胞的代谢并导致ROS的产生和降解失衡。猪卵母细胞含有大量脂质,这些脂质对ROS特别敏感。过量的ROS可能会导致脂质过氧化,线粒体功能障碍,DNA断裂和蛋白质的氧化修饰,从而损害卵母细胞的质量和发育能力。根皮苷是许多果树中的天然产物和饮食成分。150多年来,它一直被用作生理学研究的药物和工具。根皮苷的主要药理作用是通过抑制位于小肠近端肾小管和粘膜中的钠-葡萄糖同向转运蛋白来产生肾糖尿和阻断肠道葡萄糖吸收。类黄酮,包括查耳酮,例如根皮苷,是所有植物家族生产的代谢产物。这些多酚化合物具有抗氧化性能,并通过配体清除超氧阴离子,单线态氧,脂质过氧自由基和螯合金属离子。许多研究表明,与17-β雌二醇相比,根皮苷是更有效的脂质过氧化抑制剂。苹果汁和苹果提取物所含的根皮苷占总酚浓度的11%至36%,可抑制低密度脂蛋白的氧化。此外,根皮苷的糖苷可在器官浴中产生独立于内皮的独立的冠状动脉环舒张。本研究通过分别在猪卵母细胞体外成熟和早期胚胎体外培养工程中,向培养基中添加0μM、50μM、100μM、150μM的根皮苷观察其对卵母细胞以及胚胎的抗氧化能力,全能性,细胞凋亡等方面产生的影响。探究根皮苷是否可以作为一种有益的补充成分添加到体外成熟以及胚胎培养的培养基中。实验研究表明,体外成熟过程中添加100μM的根皮苷能有效提高卵母细胞孤雌激活的囊胚率,显著提高细胞内GSH水平,显著降低细胞内ROS水平。而且根皮苷显著上调了氧化应激基因SOD,CAT和GPx的表达,同时上调了线粒体功能相关基因TFAM和PGC-1α的表达。关于凋亡方面根皮苷显著下调了凋亡相关基因CASPES3和BAX的表达,下调了抗凋亡基因BCL2的表达。根皮苷处理卵母细胞后激活的囊胚,其全能性相关基因OCT4,SOX2和NANOG的表达显著上调,凋亡相关基因CASPAS3和BAX的表达显著下调,抗凋亡基因BCL2的表达显著上调。在胚胎培养阶段添加100μM的根皮苷并没有显著提高囊胚率,四细胞时期细胞内GSH和ROS的水平相近。但囊胚细胞凋亡相关基因CASPES3和BAX的相对表达显著降低,抗凋亡基因BCL2相对表达也有显著提高,根皮苷处理组的囊胚细胞凋亡更少,总细胞数更多。总之在体外成熟阶段在培养基中添加100μM的根皮苷可以提高卵母细胞的质量进而获得更多更优质的胚胎。
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