葡多酚对肝细胞蛋白激酶C的影响作用研究

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目的观察葡多酚(GPC)对小鼠肝细胞蛋白激酶C(PKC)的影响,探讨PKC转导通路在细胞增殖中的作用。方法1动物实验:将40只BALB/C小鼠随机分为正常对照组和高、中、低剂量GPC组,每组10只,雌雄各半,GPC组每天分别经口灌胃给予10、100和200mg/Kg GPC,正常对照组给予蒸馏水,连续30天后处死动物取肝脏,用免疫组织化学法检测各组肝细胞PKC和PCNA蛋白表达水平,用MTT法检测各组小鼠肝细胞的增殖活性,用比色法检测LDH浓度。2体外实验:取小鼠肝细胞制成肝细胞悬液,设正常对照组和终浓度分别为10,50,100 mg/L的GPC组,培养48h,用免疫细胞化学法检测各组肝细胞PKC和PCNA蛋白的表达水平,用MTT法测各组小鼠肝细胞的增殖活性,用比色法检测LDH浓度。结果1肝细胞PKC蛋白表达测定结果动物实验:高剂量GPC组OD值较正常对照组和低剂量GPC组显著性升高(P<0.05),中剂量GPC组OD值与正常对照组比较差异有显著性(P<0.05)。体外实验:高剂量GPC组OD值高于中、低剂量GPC组和正常对照组(P<0.05),中、低剂量GPC组的OD值较正常对照组显著性升高(P<0.05)。2肝细胞PCNA蛋白表达测定结果体内外实验结果均为:高剂量GPC组的OD值高于正常对照组和低剂量GPC组(P<0.05),中剂量GPC组OD值和正常对照组比较,差异有显著性(P<0.05)。3肝细胞增殖活性测定结果动物实验:高剂量GPC组A值较正常对照组和中、低剂量GPC组明显升高(P<0.05),中剂量GPC组A值高于正常对照组(P<0.05)。高剂量GPC组细胞增殖促进率和低剂量GPC组比较差异有显著性(P<0.05)。体外实验:细胞增殖活性由高到低为:高剂量GPC组、中剂量GPC组、低剂量GPC组和正常对照组,且高、中、低剂量GPC组细胞增殖促进率差别有显著性(P<0.05)。4乳酸脱氢酶(LDH)浓度测定结果动物实验和体外实验结果均为:高剂量GPC组LDH浓度较正常对照组和低剂量GPC组明显降低(P<0.05),中剂量GPC组LDH浓度低于正常对照组(P<0.05)。结论1 GPC对正常肝细胞的增殖活性有促进作用,GPC可提高肝细胞内PCNA蛋白表达水平。2 GPC可提高肝细胞内PKC蛋白表达水平,并通过PKC转导通路在促进细胞增殖过程中发挥重要作用。
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