【摘 要】
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背景:宫颈癌是全球女性中第四大最常见的癌症。晚期宫颈癌的平均总生存时期为16.8个月,五年的平均总生存率为68%。作为真核生物中普遍存在的应对外界刺激,维持细胞稳态的生物学过程,细胞自噬可能在宫颈肿瘤形成过程中发挥作用。许多研究表明,高危型HPV整合进宿主基因组后,可以抑制自噬通路的关键因子,如BECN1,Atg5,Atg8等分子的表达抑制自噬。但是目前尚未有研究系统性地探究高危型HPV阳性的宫颈
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背景:宫颈癌是全球女性中第四大最常见的癌症。晚期宫颈癌的平均总生存时期为16.8个月,五年的平均总生存率为68%。作为真核生物中普遍存在的应对外界刺激,维持细胞稳态的生物学过程,细胞自噬可能在宫颈肿瘤形成过程中发挥作用。许多研究表明,高危型HPV整合进宿主基因组后,可以抑制自噬通路的关键因子,如BECN1,Atg5,Atg8等分子的表达抑制自噬。但是目前尚未有研究系统性地探究高危型HPV阳性的宫颈癌细胞自噬被抑制的具体机制,以及自噬作为宫颈癌治疗靶点的现实意义。目的:探究宫颈鳞癌中自噬通路各因子的表达水平,不同自噬水平对宫颈癌细胞的影响以及高危型HPV16癌蛋白E6对于宫颈癌自噬的影响及相关机制方法:1.收集HPV阳性的宫颈癌患者的癌及癌旁组织标本,分别提取RNA做实时定量荧光PCR并行配对T检验,研究自噬通路中的关键因子在宫颈癌及癌旁组织中的表达差异;并通过GEPIA进行生物信息学分析自噬通路关键因子在宫颈癌中的表达情况,并绘制这些因子在宫颈癌患者中的生存曲线;2.构建干扰HPV16-E6的稳转细胞系-Si Ha-E6-si及HPV 16-E6癌蛋白过表达的稳转细胞系C33a-E6细胞系,分别用Rapamycin处理后诱导细胞自噬,氯喹处理后抑制细胞自噬,比较各组细胞的增殖,氧化应激损伤,自噬水平,自噬诱导及对顺铂药物作用的影响;3.标记溶酶体及自噬小体,比较HPV16 E6癌蛋白对于自噬潮的影响。结果:（1）自噬的关键因子ATG12,ULK1,BCL2的表达水平下降,可能提示宫颈癌中的自噬处于抑制状态;另外生存分析表明,ATG5,ATG12低表达的宫颈癌患者预后更好。（2）无论HPV阴性或是阳性,过度的自噬会抑制宫颈癌细胞的增殖,同时自噬诱导剂可协同顺铂的药物作用抑制细胞增殖。（3）对于HPV16阳性的宫颈癌细胞而言,抑制自噬并不能抑制细胞的增殖。（4）HPV 16-E6阳性的细胞系中,P62的表达量及LC3II/I的比值均较阴性细胞系高,提示自噬潮可能阻滞。（5）WB检测结果提示HPV16 E6癌蛋白阳性,SNARE家族的Stx17表达降低（P<0.05）,且激光共聚焦显示Si Ha及Si Ha-E6-si细胞系用Rapamycin诱导后,两组细胞的溶酶体及自噬小体的共定位率均值分别为33.83%及46.46%,两组差异有统计学意义（P<0.05）。流式检测溶酶体荧光也显示HPV 16 E6阳性的细胞荧光区间在103-104,相较于阴性组的104-105,荧光强度低;但溶酶体表面标志物LAMP1并未有明显差异（P>0.05）结论:HPV 16 E6癌蛋白可能主要通过抑制SNARE复合物中的Stx17抑制自噬小体及溶酶体的膜融合,并通过干扰溶酶体的酸性环境,抑制自噬底物的降解,从而使自噬小体积聚。自噬诱导剂联合化疗药物顺铂可增强其HPV16阳性宫颈癌患者的化疗疗效,抑制细胞增殖,可能成为晚期复发性宫颈癌患者治疗的潜在靶点。
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