论文部分内容阅读
目的：研究从黄荆子乙酸乙酯提取物得到的木脂素(VBE-3)诱导人卵巢癌CoC1细胞凋亡作用,并探讨其分子机制是否涉及抑制Akt蛋白磷酸化。方法：体外培养人卵巢癌CoC1细胞和中国仓鼠卵巢CHO-K1细胞,碘化丙啶(PI)染色流式细胞术(FCM)测定细胞凋亡率；琼脂糖凝胶电泳观察DNA梯形条带；Western Bloting分析蛋白表达及磷酸化蛋白表达水平。结果：PI染色FCM分析发现VBE-3(0.1、1.0和10.0μmol/L)诱导CoC1细胞的凋亡率分别为0.86%±0.09%、3.06%±0.44%和13.40%±0.79%；诱导CHO-K1细胞的凋亡率分别是0.32%±0.04%、0.93%±0.06%和3.27%±0.35%。10.0μmol/L的VBE-3和PI3K阻断剂LY294002孵育CoC1细胞24小时,琼脂糖凝胶电泳呈现典型的DNA梯形条带,两者合用DNA梯形条带更为明显；在同样条件下,CHO-K1细胞的基因DNA未出现DNA梯形条带。Western Bloting检测表明10.0μmol/L的VBE-3和PI3K阻断剂LY294002孵育24小时,CoC1细胞的磷酸化Akt蛋白水平分别下降至92.10%±1.96%和87.43%±0.83%,两者合用的磷酸化Akt蛋白水平是对照组的84.03%±1.50%；而CoCl细胞的磷酸化p38的蛋白水平则分别上升到106.86%±1.76%和111.73%±2.19%,两者合用的磷酸化p38蛋白水平是117.23%±1.34%。CoC1细胞的17kDa的活性Caspase-3片断的相对密度分别上调到105.20%±1.93%和111.30%±1.85%,两者合用的活性Caspase-3片断的相对密度是121.53±2.87。1.VBE-3能有效地诱导人卵巢癌CoCl细胞凋亡。2.VBE-3诱导CoCl细胞凋亡作用与其抑制Akt磷酸化、促进p38磷酸化、激活Capspase-3相关。