针刺通过TRP通道对离心运动性骨骼肌损伤后α7β1整合素活性的影响

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1研究目的观察一次急性离心运动后大鼠骨骼肌α7 integrin、β1 integrin、总FAK和磷酸化p-FAK397的蛋白表达变化以及骨骼肌细胞外基质胶原面积变化和肌内膜分布变化,分析α7β1整合素对骨骼肌细胞外基质基底膜重塑的信号通路,揭示针刺效应对离心运动性骨骼肌损伤的治疗机理。2研究方法72只健康雄性Wistar大鼠被随机分为安静组(C)、运动组(E)、运动针刺组(EA)和运动针刺阻断剂组(EAI)。除C组外其他各组别均进行90 min离心运动训练:跑台坡度-16°,速度16 m·min-1,每组5 min,共18组,组间休息2 min。针刺处理方案:(1)E组运动结束后不施加任何恢复措施。(2)EA组于运动结束40 min后针刺一次大鼠股中肌,观察一次针刺效应。(3)EAI组运动后即刻,大鼠腹腔注射含2%GdCl3(Ca2+通道阻断剂)的生理盐水溶液(40μM·kg-1),于40 min后针刺,针刺处理同EA组,观察一次阻断效应。各组大鼠分别于离心运动后1 h、48 h和120 h取股肌。采用Western blot测试α7 integrin、β1 integrin、总FAK和磷酸化p-FAK397蛋白表达变化,透射电镜观察骨骼肌细胞外基质胶原面积变化,扫描电镜观察骨骼肌细胞外基质肌内膜分布变化。3研究结果3.1骨骼肌α7 integrin和β1 integrin蛋白表达变化:(1)α7 integrin:全长α7 integrin(120kDa)和裂解α7 integrin(70 kDa)于各组别和各时相的蛋白表达水平均与安静组保持一致,无显著性变化。(2)β1 integrin:与C组相比,E组β1 integrin表达于48h达到峰值,呈显著性差异(P<0.05),EA组β1 integrin表达分别于1 h和48 h呈极显著性增加(P<0.001)和显著性增加(P<0.05),于1 h达到峰值,与E组相比呈极显著性增加(P<0.001),针刺提前了β1 integrin的蛋白表达。3.2骨骼肌磷酸化p-FAK397和总FAK蛋白表达变化:(1)磷酸化p-FAK397:与C组相比,E组、EA组和EAI组中p-FAK397的表达均低于C组,呈显著性降低(P<0.05);E组p-FAK397的表达呈先上升后下降趋势;EA组p-FAK397的表达于1 h达到峰值,与E组呈显著性增加(P<0.05);与EA组相比,EAI组p-FAK397表达于1 h、48 h呈显著性减少(P<0.05,P<0.05),针刺提前激活了FAK的活性。(2)总FAK:总FAK于各组别和各时相的表达水平均与安静组保持一致,均无显著性变化。3.3骨骼肌细胞外基质胶原面积变化:与C组相比,E组胶原纤维数量和胶原面积增大,48 h达到峰值,EA组抑制了胶原增生,呈先上升后下降趋势。与E组相比,EA组胶原面积于1 h和48 h呈极显著性降低(P<0.001);与EAI组相比,EA组胶原面积于48 h到达峰值,呈非常显著性增加(P<0.01),于120 h呈非常显著性降低(P<0.01)。3.4骨骼肌细胞外基质肌内膜分布变化:C组骨骼肌肌内膜网络交联均匀完整,错落有致;120 h E组骨骼肌肌内膜损伤未完全恢复,部分肌内膜网络存在大的胶原纤维交联空缺;120 h EA组骨骼肌肌内膜损伤减轻,存在较小的胶原纤维交联空缺;120 h EAI组骨骼肌肌内膜损伤明显,胶原纤维交联空缺较为严重。4结论4.1急性离心运动引抑制了骨骼肌α7β1整合素的活性。4.2针刺通过TRP通道调控了骨骼肌α7β1整合素的表达和活性,促进了骨骼肌损伤修复和细胞外基质的重塑。
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