论文部分内容阅读
本研究以罗非鱼的鱼皮为原料,制备分离具有抗氧化功能的生物活性肽,并进行中试化生产,以期在避免生物资源浪费同时实现罗非鱼加工副产物的高值化利用。本研究首先以罗非鱼皮为原料制备胶原蛋白,利用圆二色光谱分析罗非鱼鱼皮胶原蛋白在不同温度下的结构变化规律,利用虾头酶对制备的胶原蛋白进行酶解,结合SDS-PAGE电泳分析和DPPH·清除力分析,优化并获得最佳酶解条件。结果显示,罗非鱼鱼皮胶原蛋白的变性温度为30.8℃;虾头酶酶解胶原蛋白的最佳工艺条件为:温度40℃,虾头酶添加量为5‰,pH 8.0,酶解时间2 h。同时利用五种商业酶（复合蛋白酶、中性蛋白酶、风味蛋白酶、碱性蛋白酶和木瓜蛋白酶）对罗非鱼皮胶原蛋白进行降解效果进行比较,选择降解效果较好的碱性蛋白酶与虾头酶进行复配对罗非鱼鱼皮胶原蛋白进行复合酶解。结果显示最佳复合酶解工艺条件:碱性蛋白酶与虾头酶的复配比例为1:10,pH 8.0,反应温度47.5℃,酶解时间2 h。该工艺所得酶解液对DPPH·的清除效果较好,其清除率为85%左右。最佳酶解工艺制备胶原肽其体外抗氧化活性结果表明,其酶解液具有一定的·OH和ABTS+清除效果,IC50值分别为8.85 mg/mL和2.09 mg/mL;酶解液对Fe2+有较好的螯合作用,IC50值为0.23 mg/mL。同时,胶原肽对ACE也有很好的抑制活性,其IC50值为0.61mg/mL。利用TSK-G2000凝胶柱层析对活性组分进行分离,对分离结果采用GPC软件分析,结果表明,99.01%的活性组分分子量分布在2000 Da以下。另外,本研究运用膜超滤、SP Sepharose阳离子交换层析柱、Sephadex G-15凝胶过滤柱层析、C18反相高效液相等生化分离技术对胶原肽进行纯化,并获得具有DPPH·清除活性两个单一组分C1-1和C1-2,其对应的DPPH·清除率分别为10.31%,9.42%。结合以上制备工艺进行罗非鱼鱼皮胶原肽的中试化生产,获得分子量在1000 Da以下的胶原肽产品。本研究建立了以罗非鱼鱼皮为原料制备胶原肽的酶解条件以及抗氧化活性肽的纯化方案,并通过中试化生产,获得具有小分子量的胶原肽产品。这为罗非鱼鱼皮的深加工工艺和抗氧化肽的生产应用提供了一定的参考依据。