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紫菜是我国重要的经济海藻,年产值占整个海藻业的2/3。条斑紫菜为线性发育模式,雌雄同株。紫红紫菜的性别决定的研究是目前唯一的对紫菜性别决定机制的研究。为了深入了解紫菜的性别决定机制,掌握紫菜的发育模式,我们首次对条斑紫菜进行了性别差异基因筛选的抑制性消减杂交实验。在分离了条斑紫菜的精子囊细胞和营养细胞的样品后,提取总RNA,作为Tester和Driver。所得的微量RNA采用SMART的方法进行cDNA的合成,然后用RsaI进行酶切。将Tester分成两组,分别加上接头1和接头2R,经过两轮消减实验和两轮PCR,得到条斑紫菜性别差异的SSH文库。将该文库进行连接转化,蓝白斑筛选阳性克隆,再通过菌落PCR进行二次验证。挑选大小适合的PCR产物进行斑点杂交,筛选差异克隆测序。将测序得到的结果提交NCBI进行在线分析,结果如下:原始的碱基序列经去除载体序列、模糊序列及重复序列后得到相应克隆的EST(Expressed sequence tag)序列,共有115个。序列已全部提交NCBI。登录号为FG007280～FG007394。精子囊细胞库中特异性的克隆有65个,有5个与叶绿体基因组序列同源,28个与核基因组序列同源,19个和mRNA或cDNA同源。营养细胞库中特性的克隆有50个,11个与叶绿体基因组序列同源,6个与核基因组序列同源,16个与mRNA或cDNA同源。精子囊细胞库中和营养细胞库中分别有13个和17个的EST序列无法查到对应的同源序列,可能代表了新基因。本实验成功构建了条斑紫菜的抑制性消减杂交文库,并分析了精子囊细胞和营养细胞的差异片段。由于紫菜的性别决定机制研究较少,很多基因的功能还不明确,对于所做的分析仅能推测某些基因表达的蛋白或是参与的途径可以影响或决定紫菜的性别发育方式。紫菜性别决定作用的基因还有待于更深入更细致的研究。本实验为条斑紫菜性别差异基因的研究提供了理论基础,为进一步得到紫菜性别相关基因,培育全雌全雄株创造了条件。