蓝莓花色苷的提取纯化及抗氧化活性研究

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蓝莓为越橘属浆果,其富含大量的花色苷活性物质,具有抗氧化、降血糖、抗炎、抗癌、强心、软化血管、抗衰老、改善人的机体免疫力等多种生理功能,近年来受到大量的关注。蓝莓花色苷的高效提取,为其发挥强大功能活性提供条件。本文以贵州产兔眼蓝莓为研究对象,对兔眼蓝莓中花色苷进行提取、纯化、结构鉴定、储存稳定性与体外抗氧化活性进行研究,为进一步开发与研究具有蓝莓相关保健品或药品提供一定的理论基础与依据。通过本实验的研究,本文获得以下几个方面的结果:1.蓝莓花色苷提取工艺研究。考察提取的过程的料液比、乙醇的体积分数、温度、提取时间这四个单因素对花色苷提取得率的影响,并用响应面方法对溶剂浸提方法的工艺进行优化,得到最佳的提取方案是料液比1:20(g/mL),pH=2的80%的乙醇溶液,温度为30℃,时间为30min,提取两次,用此方法提取得到花色苷的含量为9.35mg/g,得率为35.8%。2.蓝莓花色苷纯化工艺研究。实验从AB-8,LSA-12,LX-68,D101等四种不同型号的大孔树脂填料中精选出AB-8型大孔树脂填料对蓝莓花色苷进行纯化,通过静态吸附实验,得出花色苷静态吸附平衡时间为4.5h,静态解吸完全的时间为2h。大孔树脂采用湿法装柱,柱尺寸为2.4 30cm,装柱的柱高为24cm,实验结果表明,确定用AB-8大孔树脂纯化蓝莓花色苷的工艺条件为:花色苷的浓度为3.5mg/mL,解吸液的浓度为pH=2的体积分数为50%乙醇,15倍的树脂量洗脱,2.5倍的洗脱时间吸附,流速为1mL/min。3.蓝莓花色苷的成分分析。实验通过高效液相色谱与高效液相-质谱联用的方式鉴定出了兔眼蓝莓中4种主要的花色苷,分别鉴定出兔眼蓝莓中四种花色苷单体,分别是芍药色素-3-葡萄糖苷,矮牵牛-3-葡萄糖苷,矢车菊素-3-阿拉伯糖苷,飞燕草素-3-阿拉伯糖苷。4.蓝莓花色苷的储藏稳定性研究。通过实验研究得知,该花色苷在pH小于3.0条件下比较稳定,在40℃以下热稳定性较好,在短时间内有一定的耐高温能力。对光比较敏感,该花色苷耐氧化还原性差,抗坏血酸使花色苷稳定性下降,加速花色苷溶液的褪色。亚硫酸钠对蓝莓花色苷稳定性具有良好作用。5.蓝莓花色苷的抗氧化活性研究。用花色苷纯化物与抗坏血酸V_C作抗氧活性作对比,测得蓝莓花色苷蓝莓花色苷对DPPH自由基的最大清除率可达62.04%,蓝莓花色苷对·OH自由基的最大清除率可达85.12%,蓝莓花色苷还原能力低于抗坏血酸V_C。
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