目的：观察肝纤维化形成及肝星状细胞活化过程中TGF-β1信号转导特点，探讨扶正化瘀方、尤其是其主要成份—丹酚酸B干预该信号转导的抗肝纤维化分子药理机制。 方法：本论文分为三部分。1.纤维化肝脏中TGF-β1信号转导变化特点与中药干预作用。为体内实验部分，采用二甲基亚硝胺(DMN)腹腔注射诱导大鼠肝纤维化模型，分为正常组、模型组和扶正化瘀方治疗组。模型组又分为染毒1d、3d、1w、2w、3w、4w及模型5w、6w、8w，共9个观察点；治疗组并在成模后第5w给予扶正化瘀方治疗，共4w。盐酸水解法测定肝组织羟脯氨酸(Hyp)含量；免疫组化染色观察肝组织SARA表达；Western印迹法分析肝组织TGF-β1、TGF-β受体、SARA、Smad7、Smad3与α-SMA蛋白表达。以观察整体动物纤维化肝脏TGF-β受体及其信号分子的变化，与抗肝纤维化有效中药的作用特点。 2.丹酚酸B盐对NIH/3T3细胞TGF-β受体及其胞内信号分子活性的影响。采用培养的NIH/3T3成纤维细胞，分为正常组、对照组和治疗组。对照组加100pMTGF-β1；治疗组除加入100pMTGF-β1，还分别加入1μMSA-B和10μMSA-B。Western印迹法分析NIH/3T3细胞TGF-β受体、ERK/p-ERK、PAI-1和Ⅰ型胶原蛋白表达；Northern印迹法观察NIH/3T3Ⅰ型胶原基因表达；凝胶阻滞分析NIH/3T3转录因子AP-1活性。以观察丹酚酸B对TGF-β/MAPK信号转导通路的影响。 3.HSC活化过程中TGF-β1信号转导变化特点与SA-B干预作用。分离培养原代肝星状细胞(HSC)，于培养1d，4d，7d(细胞分别处于未活化、中间活化与完全活化状态)时，加入100pMTGF-β1刺激24h，并于每个时间点设正常对照组。选择培养4d的HSC，分为正常组和TGF-β1刺激组，分别给予受体激酶抑制剂(10μMSB431542)、10-6MSA-B和10-5MSA-B。Western印迹法分析TGF-β受体、SARA、Smad7、α-SMA和FN蛋白表达；明胶酶图法测定HSCMMP-2、MMP-9活性。以观察不同活化状态HSC的基础水平与TGF-β1刺激后的信号分子变化特点，观察丹酚酸B盐对中间活化状态正常HSC与TGF-β刺激HSC功能表型、尤其是TGF-β/Smads信号转导通路的影响。 结果1.随肝纤维化发展，TGF-β1与TβR-Ⅰ蛋白表达明显增加，TβR-Ⅱ/TβR-Ⅰ比值与肝组织Hyp含量呈负相关。肝窦内细胞表达SARA蛋白，随肝纤维化发展，SARA蛋白表达逐2渐减少，Smad3总量无明显变化。扶正化瘀方明显降低肝组织TGF-β1和TβR-Ⅰ蛋白表达、抑制肝星状细胞活化，降低肝组织Hyp含量。 2.TGF-β1明显促进NIH/3T3中TβR-Ⅰ表达、ERK与转录因子AP-1活性、与细胞外基质成分生成。SA-B剂量依赖性抑制TβR-Ⅰ表达、ERK磷酸化与转录因子AP-1活性，下调TGF-β/MAPK信号转导与抑制TGF-β1刺激的细胞外基质生成。 3.随HSC自活化，基础状态α-SMA与TβR-Ⅰ蛋白等表达明显增加，TβR-Ⅱ/TβR-Ⅰ比值降低、MMP-2活性显著增强、Samd7蛋白表达增加、SARA蛋白表达减少。TGF-β1可明显促进中间活化状态HSC的α-SMA与TβR-Ⅰ蛋白表达、降低TβR-Ⅱ/TβR-Ⅰ比值、抑制SARA表达、增强MMP-2活性。丹酚酸B明显抑制HSC的α-SMA表达、提高TβR-Ⅱ/TβR-Ⅰ比值、促进SARA和Smad7蛋白表达，增强自活化HSCMMP-2活性。 结论1.首次发现肝组织窦内细胞表达SARA，且随肝纤维化发展和培养HSC活化，SARA蛋白表达减少。 2.随模型大鼠肝纤维化发展，肝脏TGF-β1与TβR-Ⅰ蛋白表达明显增加、TβR-Ⅱ/TβR-Ⅰ比值减少，Smad7表达下降。HSC自活化过程中，基础状态TβR-Ⅰ蛋白表达增加、TβR-Ⅱ/TβR-Ⅰ比值减少，SARA蛋白表达减少；TGF-β1刺激明显促进TβR-Ⅰ表达，进一步减少TβR-Ⅱ/TβR-Ⅰ比值。这些变化是肝纤维化的TGF-β1信号转导的重要分子病理特点。 3.抑制纤维化肝组织TGF-β1与TβR-Ⅰ蛋白表达，是扶正化瘀方干预纤维化肝脏TGF-β1信号转导而抗肝纤维化的重要作用机制。 4.丹酚酸B具有抑制TGF-β1刺激的成纤维细胞与肝星状细胞中TβR-Ⅰ蛋白表达，抑制成纤维细胞中ERK磷酸化和AP-1活性，促进肝星状细胞中Smad7与SARA蛋白表达，即能下调ECM生成细胞中TGF-β/MAPK与TGF-β/Smads信号转导通路。这些作用是丹酚酸B抗肝纤维化的重要分子药理机制。