目的:从凋亡细胞形态、分子水平的研究,阐述中药得力生（DLS）协同化疗药物氟尿嘧啶（5-FU）诱导人肝癌细胞（HepG₂）凋亡的作用,初步探讨DLS诱导HepG₂凋亡的分子机制,为临床联用DLS治疗肝癌提供理论依据,并为进一步研究中西医结合方法治疗肿瘤提供理论依据。方法:1.细胞培养和凋亡模型建立:传代培养HepG₂细胞,按照各实验要求及实验分组处理HepG₂细胞从而建立凋亡模型。MTT比色实验:通过MTT比色法观察DLS联合5-FU对HepG₂细胞生长抑制作用及两者联合用药效果。2.细胞形态学观察:运用倒置显微镜观察未经染色的HepG₂细胞凋亡形态学变化;采用荧光显微镜观察经Hoechst33258染色的HepG₂细胞凋亡形态学变化。3.流式细胞术检测（FCM）:按实验分组处理HepG₂细胞12h后,通过AnnexinV/PI双染色FCM检测HepG₂细胞周期分布,并结合所观察到的形态学改变分析凋亡率。4.原位末端标记（TUNEL）:运用TUNEL法在荧光显微镜下观察凋亡细胞的发生、对图像进行拍照并计算凋亡指数（AI）。结果:1.MTT比色实验:MTT检测表明DLS促进5-FU对HepG₂细胞的生长及增殖抑制作用,此作用呈明显的时效及量效关系;单独应用5-FU和联合DLS应用的IC₅₀分别为0.82μg/mL和0.32μg/mL,可见联合用药较单用IC₅₀明显降低;合并指数CI₅₀为0.73,增效倍数为2.56,说明联合用药可产生协同作用。2.细胞形态学观察:倒置显微镜下观察可见阴性对照组细胞贴壁生长,密集、核大,隐约可见多个核仁,用药组细胞作用24h后,细胞体积变小、变圆,与邻近细胞分离,胞浆浓缩;Hoechst染色后荧光观察:阴性对照组细胞核染色均一、结构完整,呈正常的蓝色,用药组表现出凋亡细胞特征性改变,其细胞核呈现致密浓染或碎片状致密浓染,染色有些发白,出现核固缩,核裂解等现象。在实验浓度范围内,两种观察方法都显示随着药物浓度及时间增加这种现象更加明显,而且同等条件下,联合组现象更突出。3.流式细胞术检测（FCM）:按实验分组处理HepG₂细胞12h后,阴性对照组凋亡细胞仅占3.40%,并且未出现凋亡峰,药物处理组均出现了凋亡峰。通过AnnexinV/PI双染色FCM观察各用药组流式图显示,G₁期前面均出现明显的凋亡峰,并随浓度的增加呈增加趋势,而且随着浓度增加G₂/M期细胞的百分比逐渐增加,联合用药组阻滞在G₂/M期更明显。根据各组细胞直方图分析,5-FU组、DLS组、联合A组、联合B组、联合C组凋亡率依次为21.30%、18.89%、22.01%、24.6%、39.2%,诱导凋亡作用呈量效关系,联合后凋亡率明显增加。4.原位缺口末端标记法（TUNEL）:TUNEL阳性信号表现为黄绿色的强荧光,位于胞核,呈环形、小圆形或颗粒状,另外可见许多典型的“出泡”所形成的细胞。在实验浓度范围内,这种黄绿色的荧光强度变化呈量效关系,且用药组AI值明显升高。其它各组与阴性对照组比较均有显著差异（P＜0.01）,联合A组与联合C组与5-FU组比较均有显著差异（P＜0.01）,联合C组与5-FU组比较有统计学意义（P＜0.05）。结论:1.DLS不仅本身可诱导HepG₂细胞凋亡,而且能促进5-FU诱导HepG₂细胞凋亡;采用凋亡检测方法可定性定量检测HepG₂细胞凋亡的发生。2.DLS、5-FU单用和联用对人肝癌HepG₂细胞的抑制增殖和诱导凋亡作用呈良好的时间依赖性和剂量依赖性。3.小剂量5-FU合并应用低毒性DLS就能达到高毒性5-FU需高剂量时才能产生的效果,从而充分体现联合用药的优点:小剂量、低毒性,高效应。4.通过细胞毒作用损伤癌细胞DNA,触发启动自杀性程序诱导细胞凋亡可能是DLS对人肝癌HepG₂细胞产生抑制作用机制之一;且中药调控肿瘤细胞凋亡机制之一是通过阻滞细胞增殖周期来实现的。