【摘 要】
：
灵芝具有抗氧化,抗肿瘤,免疫调节等药理活性,灵芝多糖是灵芝的主要活性成分之一。由于其重要的药理学活性,提高灵芝多糖的生产有重要意义。β-1,3-葡聚糖合成酶是参与灵芝多糖合成的重要酶,可将UDP-葡萄糖单体重复催化合成β-1,3葡聚糖链。在平菇和灰树花中,β-1,3-葡聚糖合成酶基因的表达与多糖的合成呈正相关。早期研究发现,在灵芝中过量表达灵芝多糖合成途径中的关键酶基因,例如ugp,pgm,gmp
论文部分内容阅读
灵芝具有抗氧化,抗肿瘤,免疫调节等药理活性,灵芝多糖是灵芝的主要活性成分之一。由于其重要的药理学活性,提高灵芝多糖的生产有重要意义。β-1,3-葡聚糖合成酶是参与灵芝多糖合成的重要酶,可将UDP-葡萄糖单体重复催化合成β-1,3葡聚糖链。在平菇和灰树花中,β-1,3-葡聚糖合成酶基因的表达与多糖的合成呈正相关。早期研究发现,在灵芝中过量表达灵芝多糖合成途径中的关键酶基因,例如ugp,pgm,gmp等,可以有效的提高灵芝多糖的产量。但在灵芝中过量表达β-1,3-葡聚糖合成酶基因对灵芝多糖合成的影响仍不清楚;此外在灵芝多糖代谢生产中,先前的研究主要针对过量表达多糖合成途径中的单个基因。通过代谢工程手段在其它物种中操作多个基因已经被证明是更有效的方式,但是,在灵芝中同时过量表达两个基因是否会更有效的提高多糖的产量,是不清楚的。本研究中,我们从灵芝的基因组中克隆获得了β-1,3-葡聚糖合成酶基因gls。gls基因全长6410 bp,编码1781个氨基酸,预测的蛋白质分子量大小为204.15k Da。gls基因编码的蛋白NCBI上报导的其它物种的β-1-3葡聚糖合酶蛋白序列相似度在90%以上。为探究gls基因对灵芝多糖产量的影响,我们构建了过表达gls基因灵芝工程菌株Oe-GLS,并对其进行发酵培养,检测了发酵过程中野生型灵芝菌株WT和Oe-GLS的生物量,胞外多糖和胞内多糖含量以及多糖合成途径相关基因磷酸葡萄糖变位酶基因pgm和UDP-葡萄糖焦磷酸化酶基因ugp的转录水平变化。结果表明,与野生型灵芝WT菌株相比,Oe-GLS的胞内多糖的最大含量是20.20±0.95 mg/100 mg,较WT提高了20%。对多糖合成途径中相关基因转录水平的分析显示,过量表达gls基因没有使pgm和ugp的转录水平发生上调,但与WT菌株相比,Oe-GLS灵芝菌株中gls基因的最大转录水平是WT菌株的7.3倍,胞内多糖的提高可能gls基因转录水平的上调有关。已有研究表明UDP-葡萄糖焦磷酸化酶基因ugp是参与灵芝多糖葡萄糖代谢途径中的关键酶基因,同时过量表达gls基因和ugp基因可能会更好的提高灵芝多糖的产量。因此,我们在灵芝中同时过量表达了gls和ugp基因。对工程菌株和WT菌株发酵后发现,在发酵周期内,灵芝工程菌株Oe-G+U胞外多糖和胞内多糖的最大产量分别是1.48 g±0.09 g/L和23.88±0.69 mg/100 mg,分别是WT菌株的1.5和1.3倍。灵芝工程菌株中pgm,ugp和gls基因的最大转录水平分别是WT菌株的1.8,8.3和6.4倍。灵芝工程菌株多糖产量的提高可能是由于这些基因转录水平的提高导致。我们的结果暗示了在灵芝中同时过量表达gls和ugp基因比单独过量表达gls基因效果好。早期的研究发现通过培养基优化提高灵芝胞外多糖的同时,也会使灵芝胞外多糖的单糖组成与抗氧化活性发生改变。为探究在灵芝中同时过量表达gls和ugp基因对灵芝胞外多糖单糖组成和抗氧化活性的影响,我们使用DEAE-Cellulose和Sephadex G-200柱色谱对灵芝菌株Oe-G+U和WT菌株的胞外多糖进行分离纯化,得到WT-0-1,WT-0.1-1,G+U-0-1,G+U-0.1-1四种组分的灵芝多糖。对四种多糖的单糖组成和体外抗氧化活性进行分析结果表明,与WT菌株相比,同时过量表达gls和ugp基因后对灵芝多糖单糖的种类没有影响,但是分别提高了葡萄糖在G+U-0-1和G+U-0.1-1中的占比。其中,葡萄糖在G+U-0-1和G+U-0.1-1的占比分别是86.72%和72.52%,与WT-0-1和WT-0.1-1相比分别提高了8.51%和9.64%,可能是gls和ugp基因同时过量表达后导致了UDP-葡萄糖的增加。此外,对多糖的抗氧化活性的研究表明G+U-0-1和G+U-0.1-1对·OH的清除能力和总还原力分别比WT-0-1和WT-0.1-1强,可能是单糖组成发生变化导致。以上的研究表明,gls基因是参与灵芝多糖合成的关键酶基因;在灵芝中同时过量表达两个基因是有效的提高灵芝多糖产量的方式;此外,在灵芝中同时过量表达gls和ugp基因可以提高葡萄糖在灵芝多糖中的占比,增强体外抗氧化活性。我们的研究为灵芝多糖的高效生产提供了新的策略,为以后通过调控灵芝多糖组分而提高其药理活性的研究奠定基础。
其他文献
陶衣渗碳法是陶衣与渗碳熏烧结合的一种陶瓷烧制技术,在古代东西方都有使用,其作用是增强器壁并防止器物渗水,同时也有一定的装饰性。在中国新石器时代陶衣渗碳法常用于黑陶的制作,非黑陶器中也有少量使用;古希腊红绘、黑绘陶器也是典型的陶衣渗碳法的应用。在当代,欧美陶艺工作者从古希腊红绘、黑绘陶器与古罗马红陶中发展出丰富多样的陶衣渗碳技法,其目的是着重于光泽、色彩、肌理等艺术表现力上。本文通过探索陶衣渗碳法的
银行因其职业便利,能清晰地掌握被执行人的财产情况,是最常见的民事协助执行主体之一,但银行基于留住客户的营业需求,时常处于执行法院与被执行人之间矛盾地位,导致实践中银行协助执行案件纠纷经常发生。盘龙支行与香港九一丰公司执行纠纷案就是比较典型、颇具争议案例。该案存在以下争议焦点:盘龙支行另开账户放款的行为如何界定、海口中院发出的《责令追回通知书》是否违法、银行是否应为协助执行中的过失承担责任。首先,盘
上世纪的90年代,在社会主义市场经济体制改革的方案中,提出国有企业混合所有制改革的意见。其后,在党的十八届、十九届全会上,更是突出强调产权主体多元化的要求。纵观国内外学者已作的研究,已简单总结和归纳了国有企业混合所有制改革的动因、对企业经营后果的影响以及路径,但以案例研究的方法探索石油化工行业的国有企业混合所有制改革的正面和反面影响的文献很少,这为本文的研究提供了一定的空间。本文以G公司为研究对象
2020年年初,新型冠状病毒肺炎爆发,逐渐在五大洲广泛传播,形势十分严峻。在过去的一年里,“疫情”已成为人们最关注的焦点话题。由于中德两国在经济、教育和科研等领域的密切关系,许多中国读者对德国新冠肺炎疫情的好奇心越来越强。这引起了译者的兴趣,把德国的疫情新闻翻译成中文。2020年3月西安外国语大学国际舆情与国际传播研究院开始委托译者翻译德国疫情新闻。从中译者选取以“德国新冠肺炎疫情的现状及应对措施
科技成果转化是国家释放创新驱动效能,提高本国综合实力的重要引擎。政府虽然不是直接参与主体,但政府职能的有效履行对于该过程的顺利实施起到了重要的调节和推动作用。我国十四五规划中强调要大幅提高科技成果转移转化成效,这对新时期的政府职能提出了更高的标准和挑战。而聚集着科技企业、技术人才、金融资本的国家级高新区是天然的成果转化区,长沙高新区作为湖南省首批国家级高新区,也是长沙市创新战略驱动的核心板块,通过
本文是一篇俄译汉模拟接续传译实践报告,以俄罗斯知名汉学家谢尔盖·萨那科耶夫在一档名为《观点》的俄罗斯政论访谈节目中对当前中美关系分析的视频为研究对象。中美关系是当今世界上最重要的双边关系,其重要性和复杂性已经超越了两国的范围,对亚太地区和世界的和平与稳定具有重大影响,中美关系的发展变化引起了国际社会的广泛关注。俄罗斯既是中国的周边大国,也是国际舞台中的重要一国。在此背景下翻译俄罗斯专家对中美关系的
通过对邪教组织犯罪的司法经验总结以及相关刑法理论的研究,现阶段我国惩治邪教组织犯罪的法律依据仍存在诸多不完善之处。司法解释将邪教组织定性为“非法组织”,不能突显出邪教组织严重的社会危害性特征。我国关于办理邪教组织犯罪的司法解释规定过于详细,有违罪刑法定原则之嫌。刑法第三百条对于邪教组织犯罪的罪名设置过于单一,不利于刑法在惩治邪教组织犯罪中积极预防功能之实现。由于我国法律没有对邪教组织中不同参与人员
近些年来,互联网的发展为人民群众的生活带来了便利,也为很多企业带来了机遇。而依托于互联网、无线通信等技术存在的新媒体,也被推上了热潮。在新媒体的环境下,不少企业凭借新媒体这阵东风,一跃成名,不光为企业带来了丰厚的利润,还使企业名声鹊起,在行业市场中赢得先机。但是,依靠传统媒体进行营销、服务的企业难以为继,于是不少企业纷纷转型,以期运用新媒体技术为企业带来更好的发展。湖北美和易思教育科技有限公司,是
政党形象是政党留给社会成员的一种综合性印象或看法,社会成员可以根据党的性质、宗旨、执政能力和执政业绩进行评价。作为一种特殊的政治资源,党的形象的好坏直接攸关人心向背,直接关系党的盛衰。新时代加强党的形象建设有助于增强政党的凝聚力、影响力和号召力,同时还能有助于塑造良好的国家形象,赢得其他国家政党的尊重。党的十八大以来,在党和人民的共同奋斗之下,中国进入了新时代。世界面临百年未有之大变局,国内建设任
互联网时代,大到国际间的交流互通,小到普通群众在社交平台记录生活点滴都离不开网络。当利益产生摩擦和冲突时,网络舆论更是双方较量的角力场。伴随着我国综合国力不断增强,国际影响力不断增强,与西方资本主义社会整体政治经济控制力逐渐下降的消长变化,意识形态矛盾更加突出,网络话语权的争夺日渐激烈。近年来,网络爱国事件层出不穷,网络爱国主义也经过流变有了新的发展形态和新的要求。中国特色社会主义进入新时代,经济