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本论文运用基因工程重组技术,研究人分泌型白细胞蛋白酶抑制剂(hSLPI)基因启动子调控HSV-TK/hIL12融合基因体外靶向特异性抗人非小细胞肺癌(hNSCLC)的作用,为进一步探索此联合基因在体内的靶向协同抗肺癌效应提供实验基础,也为其肺癌分子靶向治疗的可行性提供科学依据。本论文取得了如下学术进展:1.成功从人外周血基因组中克隆出hSLPI基因启动子,并构建了该启动子调控下的EGFP基因真核表达载体,验证了该启动子在hNSCLC细胞中特异调控其下游基因表达的活性,为进一步探索该启动子调控治疗基因靶向特异性抑制肺癌细胞生长提供实验基础和科学依据。2.成功构建了hSLPI启动子和CMV启动子调控下的HSV-TK单基因和HSV-TK/hIL12融合基因的四种真核表达载体,分别命名为pcDNA3.1-TK、phSLPI-TK、pcDNA3.1-TK/hIL12和phSLPI-TK/hIL12;并通过脂质体介导将其转染A549、SPC-A1和HepG2三种肿瘤细胞,建立了稳定转染株。为进一步研究hSLPI启动子调控HSV-TK/hIL12融合基因靶向肺癌细胞特异表达及其靶向协同抑制肺癌细胞生长提供实验基础。3. RT-PCR从mRNA水平检测稳定转染上述四种真核表达载体的A549、SPC-A1和HepG2阳性细胞克隆株表达hIL-12与HSV-TK的情况,并用ELISA和淋巴细胞增殖实验从表达hIL-12的蛋白质水平进一步证实:hSLPI启动子调控HSV-TK单基因和HSV-TK/hIL12融合基因均于肺癌细胞内实现了特异表达,hSLPI启动子在A549和SPC-A1细胞内的转录活性分别相当于CMV启动子的16.89%和20.28%,其调控下表达hIL-12的量低于CMV启动子,转染后表达的hIL-12具有增殖淋巴细胞的活性。4. hSLPI启动子调控HSV-TK/GCV系统在体外靶向特异杀伤hNSCLC细