猪流行性腹泻病毒（Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV）属于冠状病毒科,α-冠状病毒属（Alpha-coronavirus）,可感染不同年龄段不同品种猪,引起猪流行性腹泻（Porcine epidemic diarrhea,PED）。PED是一种急性的、传染性极强的肠道疾病,以仔猪的呕吐、脱水、水样腹泻和高死亡率为主要特征。PED具有变异性强、传播速度快和传播范围广的特点,是危害我国养猪业健康发展的重要疫病之一。迄今,国内外已研制了不同种类的PED灭活苗或弱毒苗,因疫苗的广泛使用,PED在中国曾得到了较好的控制。但是,2010年后,由于PEDV变异株的出现,突破了现有的疫苗策略,我国不同地区出现了严重的PED疫情,加剧了防控难度。在无有效疫苗情况下,抗病毒药物是疫苗接种等传统疫病控制策略的重要补充。相比疫苗,筛选抗病毒药物更为方便快捷,不存在生物安全问题,因此可比疫苗更快投入应用。快速寻找具有抗病毒作用的天然植物提取物作为饲料或饲料添加剂,是一种高效且低成本的应对策略。另外,药物抑制病毒感染分子机制的解析,有助于发现抗病毒新靶点。在实验室前期研究中,用Cell-based ELISA方法在Vero-E6细胞上筛选到了抑制PEDV感染的天然活性化合物,包括黄腐酚,但是其如何抑制PEDV有待进一步研究。另外,由于Vero-E6是干扰素基因缺陷细胞,因此,本研究使用Marc-145细胞重复筛选试验,旨在找到不同于Vero-E6细胞上筛选到的化合物并进行作用效果的验证,为后期探究其是否通过干扰素途径抑制PEDV奠定基础。1.黄腐酚对PEDV感染的体外抑制作用黄腐酚（Xanthohumol）是一种异戊二烯基黄酮类物质,仅存于啤酒花中,具有显著的生物活性。研究发现,黄腐酚具有抗病毒作用,但尚无关于其抑制PEDV感染的研究。本实验室前期研究发现黄腐酚是一种抑制PEDV感染的化合物,为验证其抑制效果,进行了RT-PCR、空斑形成试验、Western Blot和MTT等试验。结果表明,黄腐酚明显抑制PEDV感染Vero-E6细胞中病毒M基因mRNA水平,显著降低细胞内和上清中病毒粒子的产生;黄腐酚抑制PEDV呈剂量依赖性且对Vero-E6细胞几乎无毒性;此外,黄腐酚处理能明显降低PEDV不同毒株感染细胞中N蛋白表达水平。这些发现为进一步研究黄腐酚抗PEDV感染机制,研制抗PEDV或广谱抗冠状病毒药物奠定了基础。2.在Marc-145细胞上筛选抗PEDV活性化合物及验证本研究用Cell-based ELISA的药物筛选方法在Marc-145细胞上筛选抑制PEDV感染的天然活性化合物,然后使用RT-PCR、Western Blot、空斑形成和MTT试验检测候选化合物的抗病毒效果。结果显示,在803个化合物中,有7种化合物能够抑制PEDV感染。经验证发现,7种化合物能明显抑制PEDV感染Marc-145细胞中病毒N基因的mRNA水平和蛋白表达水平,显著降低上清中病毒粒子的产生。同时,MTT试验显示这些候选化合物均无明显的细胞毒性。最后,通过分析化合物对病毒感染周期的影响,结果显示,这些化合物不影响病毒的吸附、入胞和释放,但可以明显抑制病毒的复制。这些发现为进一步研究化合物抑制PEDV的感染机制提供了重要依据。