肿瘤转移是目前临床治疗非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer,NSCLC）面临的巨大挑战。肿瘤细胞上皮间质转化（epithelia-mesenchymal transition,EMT）的异常激活是促进肺癌转移的关键机制。肿瘤来源的外泌体（tumor-derived exosomes,TDEs）在EMT和癌症进展过程中发挥重要作用,对肿瘤细胞的侵袭和转移具有极其重要的调控作用。外泌体作为目前肿瘤研究的前沿与热点,其形成过程及其结构和功能的发挥与细胞膜脂筏密切相关。中药白英（Solanumlyratum Thunb.）具有清热解毒之功,常用于治疗多种恶性肿瘤。白英富含多种生物活性成分,研究发现其中所含甾体生物碱具有显著的抗肿瘤活性。前期研究表明,白英总碱（total alkaloids from Solanum lyratum,TAS）具有显著抗 NSCLC药效,并证明其中所含的甾体生物碱具有独特的抗肿瘤机制,该机制可凝集细胞膜脂筏胆固醇,调控TDEs的生成和功能,并抑制肿瘤血管生成。在此基础上,结合TDEs在肿瘤转移中的关键作用,本文提出开展白英甾体生物碱干预外泌体,介导EMT抑制其促NSCLC转移的抗肿瘤机制研究。本论文分为两部分,旨在前期研究基础上,进一步研究TAS的抗肿瘤转移作用及其物质基础,并结合TDEs与细胞膜脂筏的密切联系,从细胞活性和分子机制两方面,对白英甾体生物碱介导EMT抑制NSCLC转移进行深入研究。1.白英总碱的化学成分研究目的:对中药白英的生物碱类成分进行研究,明确TAS抗肿瘤物质基础。方法:采用ODS、硅胶柱色谱和HPLC相结合的方法对TAS进行分离纯化。通过UHPLC-ESI-Q-TOF-MS、红外光谱、1D和2D NMR以及现有文献对分离得到的单体化合物进行了结构鉴定。结果:从白英中分离鉴定了 33个单体化合物,包括29个甾体生物碱类化合物（1～28,31）,1个苯丙酰胺类化合物（29）,1个异喹啉类生物碱（30）和2个脂肪烃类化合物（32,33）。其中化合物1～16为新化合物,均为甾体生物碱,命名为 Solalyraine J、Solalyraine K、Solalyraine L、Solalyraine M、Solalyraine N、Solalyraine O、Solalyraine P、Solalyraine Q、Solalyraine R、Solalyraine S、Solalyraine T、Solalyraine U、Solalyraine V、Solalyraine W、Solalyraine X、Solalyraine Y,化合物30～33为首次从白英中分离得到。2.白英甾体生物碱干预A549细胞外泌体抑制肿瘤转移研究目的:研究白英甾体生物碱干预TDEs抑制NSCLC转移的分子机制。方法:采用CCK8法,检测分离所得的其中6个新甾体生物碱:GS1、GS2、GS3、GS4、GS5和GS6对人肺腺癌A549细胞增殖的影响;采用超速离心法提取A549细胞外泌体,并通过Western blot、透射电镜和纳米粒度分析技术鉴定所分离TDEs;通过体外迁移、侵袭和粘附实验,研究白英甾体生物碱干预TDEs对A549细胞转移的影响;Western blot检测EMT标志蛋白N-cadherin、E-cadherin和 Vimentin 以及 p-JAK2、JAK2、p-STAT3、STAT3 的表达水平。结果:处理 48 h 后,GS1、GS2、GS3、GS4、GS5 和 GS6 对 A549 细胞抑制作用较弱,但有明显抑制趋势,故根据前期结果及文献报道,选定GS2进行后续实验研究。超速离心法分离所得的A549细胞外泌体呈凹陷的半球形或茶托状囊泡形态,外泌体中标记蛋白CD9、TSG101的表达均呈阳性;GS2干预前后,A549细胞所分泌的外泌体粒径主要集中在50～80nm;处理48h后,A549细胞上清中外泌体浓度较未干预时增加了 1.75倍。与空白对照组和空白外泌体组相比,GS2处理后的A549细胞外泌体显著抑制A549细胞的迁移、侵袭和粘附能力（P<0.001,P<0.001,P<0.001）,显著上调 EMT 标志蛋白 E-cadherin（P<0.01）,下调 N-cadherin 和 Vimentin（P<0.001,P<0.001）表达,并且下调 p-JAK2 和p-STAT3 的表达（P<0.01,P<0.01）。结论:白英甾体生物碱GS2具有抑制肿瘤转移的活性,GS2的干预使A549细胞外泌体有了显著体外转移抑制活性,并可能通过抑制JAK2/STAT3信号通路的磷酸化和EMT过程来调控外泌体抑制NSCLC转移。