猪链球菌2型（Streptococcus suis serotype 2; SS2）感染已经成为一种严重的人畜共患病,不仅造成大量猪死亡,更严重威胁着人类健康。我国于1998年和2005年两次在江苏和四川暴发人感染猪链球菌2型疫情,分别造成14人和39人死亡。不同于国外人感染病例以脑膜炎为主的特点,我国死亡病例多为休克型,病例起病急,病情重,病程短,死亡率高。目前对我国SS2的致病机制知之甚少,目前已知的毒力因子还不能全面解释毒素休克综合征（TSS）的发生,而对致病机制的缺乏了解又阻碍了SS2疫苗的研究。已知的毒力因子和保护性抗原包括荚膜多糖（CPS）、溶菌酶释放蛋白（MRP）、胞外因子（EF）、溶血素（SLY）、烯醇酶、6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶（6PGD）、Sao等。在此基础上发现更多、更有效的保护性抗原成为SS2疫苗研究工作的当务之急。本研究通过免疫蛋白质组学识别出SS2菌株98012细胞壁和上清蛋白中的32种免疫原性蛋白,其中8种为细胞壁蛋白、5种为非细胞质蛋白（Non-Cytoplasm Protein）、其它为胞质蛋白。使用比较蛋白质组学方法识别出我国高致病株与普通致病株差异表达蛋白,并进行后续验证。选择其中的10种蛋白以pET-32a（+）为载体重组表达,表达已知保护性抗原MRP为后续研究阳性对照。免疫大鼠获得抗血清,Western Blot验证10种蛋白在16种不同SS2菌株中的存在状况,发现SSU98₀171、SSU98₁094、SSU98₁549、SSU98₁819、SSU1664五种抗原在不同菌株间高度保守,SSU98₀156、SSU98₀197、SSU98₀201、SSU98₀267、SSU98₁675在不同菌株之间表达有差异。分析比较蛋白质组学结果以及后面的验证结果,并与不同菌株的致病力相结合,笔者将SSU98₀156、SSU98₀197、SSU98₀267、SSU98₁675这4种蛋白定义为不同致病力菌株之间的差异表达蛋白,其中SSU98₁675为国内高致病株与国外致病株之间的差异蛋白,SSU98₀197、SSU98₀267在不同菌株间存在多态性。随后对除SSU98₀156之外的其它10种重组抗原进行评价。比较6名病人和5名健康人血清中针对10种重组抗原的抗体差异,结果显示SSU98₀197、SSU98₁094、SSU98₁549、SSU1664、MRP的抗体水平在病人比健康人显著性升高。比较针对10种重组抗原的抗体在人工感染小型猪前后血清中的变化情况,结果显示SSU98₀197、SSU98₁094、SSU98₁549、SSU98₁675、SSU1664的抗体在感染后比感染前显著性升高。比较针对10种重组抗原的抗体在灭活全菌免疫小型猪前后的变化情况,结果显示SSU98₀197、SSU98₀267、SSU98₁094、SSU98₁549、SSU1664、MRP的抗体在免疫后比免疫前显著性升高。体外大鼠抗血清调理吞噬试验显示有6种蛋白的抗血清调理杀菌率在50%以上,分别是SSU98₀171、SSU98₀197、SSU98₀267、SSU98₁094、SSU98₁819、SSU1664。根据前期试验结果,选择7种抗原以pET-28a（+）为载体重新表达,以去除TRX（硫氧还蛋白）对动物试验的影响,成功表达出5种抗原。使用QS-21（皂角甙的精细提取物）为佐剂,在CD-1小鼠模型上验证5种抗原的保护效果。首先对5种抗原单独免疫保护效果进行评价,使用1.5×LD50的98012菌液攻毒, SSU98₀197、SSU98₁094、SSU98₁675、MRP免疫组有较高存活率,分别为70%、67%、60%、70%,与单纯QS-21免疫组比较,经Wilcoxon检验分析,均有显著性差异,而SSU1664免疫组没有保护性。增加攻毒量后SSU98₀197、SSU98₁094、SSU98₁675、MRP免疫组存活率均下降,分别为20%、20%、50%、20%。与单纯QS-21免疫组比较,均有显著性差异,而SSU1664免疫组仍然没有保护效果。对保护效果好的SSU98₀197、SSU98₁094、SSU98₁675尝试使用组合抗原免疫小鼠。使用6.6×LD50的98012菌液攻毒,分组为SSU98₀197、SSU98₁094、SSU98₁675、SSU98₀197与SSU98₁675组合、SSU98₁094与SSU98₁675组合、SSU98₀197与SSU98₁094组合、三种蛋白组合免疫,7个试验组,存活率分别是30%、30%、30%、50%、40%、30%、60%,与单纯QS-21免疫组比较,经Wilcoxon检验分析,均有显著性差异。7个免疫组之间比较,仅三种蛋白组合免疫组与SSU98₀197单独免疫组有显著性差异。进一步比较SSU98₀197、SSU98₁094和SSU98₁675三种蛋白组合免疫组以及SSU98₀197和SSU98₁675两种蛋白组合免疫组的保护效果。4.8×LD50的98012菌液攻毒时,三种蛋白组合免疫组,SSU98₀197与SSU98₁675组合免疫组的存活率分别是60%和40%,两组间无显著性差异。使用7×LD50的98012菌液攻毒,三种蛋白组合免疫组和SSU98₀197+SSU98₁675组合免疫组的存活率分别是50%和20%,经Wilcoxon检验分析,两组间有显著性差异,提示三种蛋白组合免疫组对高剂量菌液的攻毒仍然有保护效果。将筛选出的3种保护性抗原SSU98₀197、SSU98₁094、SSU98₁675命名为SIP1、Lpp36、SIP2。构建基因缺失突变株05ZYΔLpp36和05ZYΔSIP2。为后续的功能研究奠定基础。