目的:牙周炎是临床常见问题,发病率高,然而其具体机制目前尚不完全明确,且传统的抗生素治疗效果有限。最近科学研究已证实,细胞焦亡是牙周炎发生和发展中一个至关重要的环节,因而细胞焦亡信号通路可能是探索其发病机制的一个新颖的切入点,而寻找一种可以特异性抑制该通路的非抗生素药物可能是治疗牙周炎的一个突破口。因此,我们实验的目的是研究牙龈卟啉单胞菌-脂多糖（P.gingivalisLPS）和三磷酸腺苷（ATP）是否能通过激活人牙龈成纤维细胞（HGFs）中的NF-κB/NLRP3/GSDMD信号来诱导细胞焦亡,明确异甘草素（isoliquiritigenin,ISL）是否能通过抑制NF-κB/NLRP3/GSDMD信号来减轻细胞焦亡。方法:1.HGFs原代培养与鉴定:采用酶消化法培养原代HGFs,并采用光学显微镜直接观察法和免疫荧光法,分别对细胞形态特征与特异性的蛋白标志物质进行鉴别。2.药物适宜浓度的筛选及实验分组处理:将DMSO（0、0.1%、0.5%、1.0%、2.5%、5.0%、10.0%）和异甘草素（0、2.5、5、7.5、10、20μM）分别作用于HGFs 24小时后,应用CCK-8法检测DMSO或异甘草素对HGFs活性的影响,从而筛选出后续实验中合适的应用浓度。将实验细胞分为4组:对照组、ISL组、LPS+ATP组和LPS+ATP+ISL组。3.细胞焦亡模型的构建与抑制:通过P.gingivalis-LPS和ATP联合诱导出HGFs中的细胞焦亡模型,并用异甘草素对该模型进行处理。利用实时荧光定量聚合酶链式反应法（q RT-PCR）、蛋白免疫印迹法和酶联免疫吸附法（ELISA）测定了NF-κB、NLRP3炎症小体、GSDMD以及IL-1β在基因和蛋白水平上的表达情况。通过DCFH-DA荧光探针测定细胞内活性氧（ROS）的水平。通过Hoechst 33342/碘化丙啶（PI）双染色法、细胞毒性实验测定以及Caspase-1活性检测进一步证实异甘草素对P.gingivalis-LPS和ATP诱导的HGFs中细胞焦亡的影响。结果:1.HGFs原代培养及鉴定:显微镜下观察到的原代细胞形态是最典型的牙龈成纤维细胞形态。免疫荧光结果也显示,细胞为人牙龈成纤维细胞。2.药物适宜浓度的筛选:CCK-8检测数据表明,在0、0.1%、0.5%和1.0%DMSO中进行细胞培养,24小时后细胞活力不受影响;在0.1%DMSO条件下,当异甘草素浓度高于5μM时,细胞活力随着异甘草素浓度的升高而降低。因此,我们选择了0.1%DMSO和5μM异甘草素进行后续实验。3.细胞焦亡模型的构建与抑制:q RT-PCR、蛋白免疫印迹法和ELISA结果显示:在P.gingivalis-LPS和ATP的联合刺激后NF-κB、NLRP3炎症小体、GSDMD和IL-1β的基因和蛋白表达量均增多,而经异甘草素处理后相关基因和蛋白的表达量均降低。同样地,在P.gingivalis-LPS和ATP的联合刺激后,细胞内ROS的水平提高、细胞膜受损细胞的比例增加、Caspase-1活性升高以及乳酸脱氢酶的释放也增多,而用异甘草素处理后则明显抑制了这些结果。结论:P.gingivalis-LPS和ATP可以通过激活HGFs中的NF-κB/NLRP3/GSDMD信号来诱导细胞焦亡,并且异甘草素可以通过抑制这些信号减轻P.gingivalis-LPS和ATP诱导的细胞焦亡。我们的研究为牙周炎的发病机制提供了新方向,为牙周炎的治疗提供了新的作用靶点。异甘草素有望成为牙周炎治疗的潜在候选药物。