论文部分内容阅读
脱氧雪腐镰刀菌烯醇(Deoxynivalenol, DON)和玉米赤霉烯酮(Zearalenone, ZEA)均是由镰刀菌产生的霉菌毒素,两者经常同时出现,可在世界范围内污染农作物、粮食制品和饲料,进而进入食物链,严重危害人和牲畜的健康。近年来,关于DON和ZEA的毒性研究多集中在啮齿类动物细胞毒性和致癌性等方面,对禽类免疫毒性的研究较少。本课题通过对哈尔滨周边养鸡场饲料中DON和ZEA含量的检测,分析哈市周边地区多种鸡饲料二者的污染情况；为了探讨DON和ZEA对鸡免疫细胞的毒性机制,以55～65日龄健康公鸡脾脏制备淋巴细胞悬浮液,经DON(0、0.2、0.8、3.2、12.5和50μg/mL)、ZEA (0、0.1、0.4、1.6、6.25和25μg/mL)以及二者联合(DON0、0.0125、0.05、0.2和0.8μg/mL, ZEA0、0.006、0.025.0.1和0.4μg/mL)暴露48h,高效液相色谱方法检测鸡脾脏淋巴细胞DNA总甲基化水平,实时荧光定量PCR方法检测甲基转移酶(DNMT1、DNMT3A和DNMT3B)、去甲基化酶(MBD2)和炎症因子(COX-2、NF-κB、TNF-α、iNOS)基因表达,同时检测了鸡脾脏淋巴细胞抗氧化功能(SOD、GSH-Px、MDA)和蛋白质羰基含量。研究结果表明：1)哈尔滨市周边地区45份鸡饲料中DON和ZEA阳性检出率很高,其中DON检出率是84%,超过国家标准的饲料样品占42%,ZEA检出率是82%,超过国家标准的饲料样品占37%,表明哈尔滨市周边鸡饲料中DON和ZEA污染较重。2)DON和ZEA单一及联合暴露,均能导致鸡脾脏淋巴细胞DNA总甲基化水平降低。除DON染毒组使DNMT3B表达升高外,其它染毒组均抑制甲基转移酶(DNMT1、DNMT3A、 DNMT3B)和去甲基化酶(MBD2) mRNA表达,联合组引起的DNA甲基化模式的改变高于单一暴露组。3)DON和ZEA单一及联合暴露均能上调鸡脾脏淋巴细胞COX-2、NF-κB、TNF-α和iNOS mRNA表达水平,使细胞发生炎性损伤；并能导致鸡脾脏淋巴SOD和GSH-Px活性降低,MDA和蛋白质羰基含量增加,使细胞发生氧化损伤,从而加重炎性损伤程度。并且联合组对细胞的影响高于单一暴露组。综上所述,本试验哈尔滨市周边鸡饲料中DON和ZEA污染较重,并从DNA甲基化、氧化应激和炎症损伤的角度,证实DON和ZEA单一及联合暴露对鸡脾脏淋巴细胞具有细胞毒性作用。