论文部分内容阅读
麦芽糖是面粉中最主要的可发酵糖,除此之外还有少量的葡萄糖、果糖等可发酵糖类。因此,麦芽糖的利用速度是影响面团快速发酵的关键因素。而因葡萄糖的存在所带来的阻遏效应是麦芽糖利用的主要限制因素,所以解除葡萄糖阻遏是提高麦芽糖利用能力的有效途径。本论文通过对麦芽糖代谢直接相关基因的调节以及SNF1蛋白激酶中的β亚基的研究来探讨其对麦芽糖代谢能力的影响。主要研究内容如下:(1)在本实验室研究的基础上,分别以工业面包酵母菌株BY14以及它的单倍体BY14-17α和BY14-70a为亲本菌株,敲除阻遏蛋白编码基因SSN6同时过表达麦芽糖代谢途径中正调节的SNF1,最终获得突变株B-S+S,17α-S+S,70a-S+S。不加糖面团发酵性能实验结果显示重组菌株17α-S+S发酵性能明显提高,1 h内产气量达到710 mL,相应的发酵时间缩短了 15%,发酵力提高了 39%。模拟面团发酵性能结果显示,在两种模拟面团培养基(麦芽糖,混糖)中,17α-S+S的麦芽糖利用能力分别提高8.2%和10%;(2)以工业面包酵母菌株BY14以及它的单倍体BY14-17α和BY14-70a为亲本菌株,敲除阻遏蛋白编码基因SSN6同时对编码麦芽糖酶的基因M4L62进行过表达,最终获得突变株B-S+M,17α-S+M,70a-S+M。不加糖面团发酵性能实验结果显示,17α-S+M发酵性能显著提高,lh内,17α-S+M的CO2产气量能够达到690 mL,与亲本菌株BY14α相比提高了 165 mL,发酵时间缩短了 15%,发酵力提高了 35%。同时模拟面团发酵性能结果显示,在两种模拟面团培养基(麦芽糖,混糖)中,17α-S+M的麦芽糖利用能力分别提高8.2%和7.2%;(3)将构建好的突变菌株17α-S+S与70a-S+M进行杂交得到敲除SSN6同时过表达SNF1和M4L62的双倍体重组菌株B-S+MS。其在不加糖面团中的发酵性能结果显示:与亲本菌株相比,B-S+MS的面团发酵力提高了 18.6%;(4)对编码Snfl蛋白激酶β亚基的SIP1,SIP2分别进行过表达,得到重组菌株17α+SIPl,17α+SIP2。并与B+GAL83 一起进行发酵来完整分析Snfl蛋白激酶中的β亚基在面包酵母麦芽糖代谢中的作用。发酵性能及耗糖结果分析表明SIP1及SIP2的过表达对面包酵母的麦芽糖利用并无明显影响,而GAL83的过表达会降低面团的发酵力以及麦芽糖代谢能力。