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目的:
(一)通过本研究探索一种通过临床中较易获得的检验学及影像学指标评估新辅助化疗效果的方法。
(二)本研究拟通过检测骨肉瘤患者肿瘤组织及癌旁组织中Skp2的表达情况，探讨Skp2与骨肉瘤新辅助化疗耐药之间的相关性。
方法:
第一部分:收集2018年02至2019年06月在我科就诊，按标准骨肉瘤诊疗方案治疗的骨肉瘤患者临床资料，使用本研究中制定的评估方法评估化疗效果，并行肿瘤细胞坏死率检查，根据以上资料行诊断性试验研究，探讨此种评估方法的可行性及准确率。
第二部分:按照耐药组和非耐药组分别进行以下操作:1)qRT-PCR检测Skp2、其上游信号蛋白AKT(蛋白激酶B)、底物(p21、p27、Foxo1)、E-caderin(E型钙粘蛋白)的mRNA表达水平;2)western blotting检测Skp2、其上游信号蛋白AKT、底物(p21、p27、Foxo1)、E-caderin表达水平。
结果:
第一部分:共收集17例行肿瘤细胞坏死率检查的患者，其中肿瘤细胞坏死率＞90％共6例，经所制定评估方法评价共5例患者化疗效果不佳，行诊断性分析，灵敏度(Sen)=66.67％;特异度(Spe)=90.91％;阳性似然比(LR+)=0.8:阴性似然比(LR-)=0.83;诊断指数(DI)=157.58％;Youden指数(γ)=57.58％;粗符合率(CA)=82.35％;调整一致性(AA)=80.23％;Kappa系数=0.598。
第二部分:通过qRT-PCR及Western Blotting检测发现，癌组织Skp2表达量明显高于癌旁组织(P＜0.05)，在肿瘤组织中，耐药组中Skp2底物P27、Foxo1表达均明显低于非耐药组(P＜0.05)，耐药组骨肉瘤标本中E-cadherin表达量明显低于非耐药组(P＜0.05)，耐药组骨肉瘤标本中AKT表达量明显高于非耐药组(P＜0.05)。
结论:
第一部分:我们制定的评估方法具有一定的优势，具有一定的临床参考价值，可作为后期研究的预试验，但仍存在一定的缺陷，需要进一步完善和修正。
第二部分:在骨肉瘤标本中Skp2仍然发挥着癌基因的作用，同时其高表达与骨肉瘤新辅助化疗药物耐药之间存在密切关系，耐药骨肉瘤标本产生EMT样分子标记变化可能与Skp2高表达有关，AKT-Skp2信号通路在骨肉瘤患者体内可能通过其底物浓度的调节发挥作用，靶向抑制Skp2表达可能为改善新辅助化疗药物敏感性和提高骨肉瘤患者5年生存率提供了一个新的治疗策略。
(一)通过本研究探索一种通过临床中较易获得的检验学及影像学指标评估新辅助化疗效果的方法。
(二)本研究拟通过检测骨肉瘤患者肿瘤组织及癌旁组织中Skp2的表达情况，探讨Skp2与骨肉瘤新辅助化疗耐药之间的相关性。
方法:
第一部分:收集2018年02至2019年06月在我科就诊，按标准骨肉瘤诊疗方案治疗的骨肉瘤患者临床资料，使用本研究中制定的评估方法评估化疗效果，并行肿瘤细胞坏死率检查，根据以上资料行诊断性试验研究，探讨此种评估方法的可行性及准确率。
第二部分:按照耐药组和非耐药组分别进行以下操作:1)qRT-PCR检测Skp2、其上游信号蛋白AKT(蛋白激酶B)、底物(p21、p27、Foxo1)、E-caderin(E型钙粘蛋白)的mRNA表达水平;2)western blotting检测Skp2、其上游信号蛋白AKT、底物(p21、p27、Foxo1)、E-caderin表达水平。
结果:
第一部分:共收集17例行肿瘤细胞坏死率检查的患者，其中肿瘤细胞坏死率＞90％共6例，经所制定评估方法评价共5例患者化疗效果不佳，行诊断性分析，灵敏度(Sen)=66.67％;特异度(Spe)=90.91％;阳性似然比(LR+)=0.8:阴性似然比(LR-)=0.83;诊断指数(DI)=157.58％;Youden指数(γ)=57.58％;粗符合率(CA)=82.35％;调整一致性(AA)=80.23％;Kappa系数=0.598。
第二部分:通过qRT-PCR及Western Blotting检测发现，癌组织Skp2表达量明显高于癌旁组织(P＜0.05)，在肿瘤组织中，耐药组中Skp2底物P27、Foxo1表达均明显低于非耐药组(P＜0.05)，耐药组骨肉瘤标本中E-cadherin表达量明显低于非耐药组(P＜0.05)，耐药组骨肉瘤标本中AKT表达量明显高于非耐药组(P＜0.05)。
结论:
第一部分:我们制定的评估方法具有一定的优势，具有一定的临床参考价值，可作为后期研究的预试验，但仍存在一定的缺陷，需要进一步完善和修正。
第二部分:在骨肉瘤标本中Skp2仍然发挥着癌基因的作用，同时其高表达与骨肉瘤新辅助化疗药物耐药之间存在密切关系，耐药骨肉瘤标本产生EMT样分子标记变化可能与Skp2高表达有关，AKT-Skp2信号通路在骨肉瘤患者体内可能通过其底物浓度的调节发挥作用，靶向抑制Skp2表达可能为改善新辅助化疗药物敏感性和提高骨肉瘤患者5年生存率提供了一个新的治疗策略。