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目的: 探讨脊髓小胶质细胞活化在宫颈扩张(uterine cervical distension,UCD)所致急性内脏痛中的作用,以及电针刺激“合谷”“三阴交”是否通过抑制小胶质细胞活化缓解UCD大鼠内脏痛。 方法: 按照文献介绍的方法并略作改良后行宫颈扩张,二个自制细金属钩(以22G穿刺针弯曲制成)尖端分别从一侧宫体与宫颈交界处穿入进入宫颈腔,再从宫颈与阴道交界处穿出,金属钩末端各悬挂砝码扩张宫颈,建立大鼠急性UCD模型。 第一部分: 观察UCD后大鼠腹直肌肌电(EMG)振幅变化。24只SD大鼠随机分为3组(n=8):正常组、Sham组和UCD组。正常组不做任何处理;Sham组手术暴露宫颈,但不行宫颈扩张;UCD组手术暴露宫颈后行宫颈扩张,扩张强度为75g。于宫颈扩张后30min、60min、120min分别记录大鼠EMG振幅变化。 第二部分: 观察UCD对脊髓小胶质细胞活化的影响。分组同第一部分(n=4)。第一部分实验发现UCD后60min,大鼠EMG变化最为显著,因此于宫颈扩张60min后处死大鼠,4%多聚甲醛灌注后取胸腰段(T12-L2)脊髓标本行免疫组化检查,观察UCD对大鼠脊髓小胶质细胞活化的影响。 第三部分: 36只鞘内置管成功后的SD大鼠随机分为米诺环素组、PBS组、UCD组(n=12)。米诺环素组连续3天鞘内注射0.5nmol米诺环素后行UCD造模。PBS组、UCD组则分别相应给予等剂量的PBS、生理盐水后行UCD造模。分别记录造模后宫颈扩张前各组大鼠EMG振幅基础值及宫颈扩张后30min、60min、120min时大鼠EMG振幅的变化(n=8)。其余每组4只大鼠于宫颈扩张60min后处死大鼠,4%多聚甲醛灌注后取胸腰段(T12-L2)脊髓标本行免疫组化检查,观察鞘内米诺环素对UCD大鼠脊髓小胶质细胞活化的影响。 第四部分: 36只SD大鼠随机分为电针组、电针对照组、UCD组(n=12)。电针组将针灸针刺入大鼠双侧“合谷”“三阴交”(“合谷”穴位于前肢第一、二掌骨之间,进针深度1mm;“三阴交”穴位于后肢内踝尖直上10mm处,进针深度3mm)后接韩氏穴位神经刺激仪给予2/100Hz疏密波电刺激30min(输出电流为10-14mA)后行UCD造模,造模成功后继续给以2/100Hz疏密波电刺激120min,电针对照组只针刺不接韩氏穴位神经刺激仪刺激,UCD组则无任何处理直接行UCD造模。分别记录各组UCD后30min、60min、120min大鼠EMG振幅的变化(n=8)。其余每组4只大鼠于宫颈扩张60min后处死,4%多聚甲醛灌注后取胸腰段(T12-L2)脊髓标本行免疫组化检查,观察电针刺激对UCD大鼠脊髓小胶质细胞活化的影响。 结果: 第一部分: Sham组、正常组、UCD组(n=8)大鼠EMG基础值振幅差异无统计学意义(P>0.05)。造模后,UCD组大鼠EMG振幅与基础值相比在UCD后30min、60min、120min均增加,差异有统计学意义(均P<0.05);UCD后30min、60min、120min三个时间段相比,以UCD60min时EMG振幅增加最为明显(P<0.05)。 宫颈扩张后30min、60min、120min,与Sham组比较,UCD组大鼠EMG振幅增加,差异有统计学意义(P<0.05),但正常组与Sham组相比大鼠EMG振幅变化无统计学意义(P>0.05)。 第二部分: UCD后,与Sham组相比,UCD组大鼠脊髓胸腰段(T12-L2)Iba1(小胶质细胞标记物)反应阳性细胞数量明显增加,差异有统计学意义(P<0.05);免疫阳性细胞主要集中在胸腰段双侧脊髓背角深层(Ⅳ~Ⅴ层)及中央管周围(X层)。Sham组与正常组相比Iba1反应阳性细胞数量无明显差异(P>0.05)。 第三部分: UCD组、PBS组、米诺环素组大鼠EMG基础值振幅差异无统计学意义(P>0.05)。 与基础值相比,各组UCD后30min、60min、120min EMG振幅明显增加(P<0.05)。与PBS组相比,UCD后60min、120min,米诺环素组EMG振幅明显减弱;但UCD后30min,两组间EMG振幅无明显差异。PBS组与UCD组相比,UCD后各时间点EMG振幅差异均无统计学意义(均P>0.05)。 UCD后60min,米诺环素组大鼠脊髓胸腰段(T12-L2)Iba1反应阳性细胞数量较PBS组显著减少,差异有统计学意义(P<0.05);但PBS组与UCD组相比差异无统计学意义(P>0.05)。 第四部分: UCD组、电针组、电针对照组大鼠EMG基础值振幅差异无统计学意义(P>0.05)。 与基础值相比,各组UCD后30mi n、60min、120min EMG振幅明显增加(P<0.05)。UCD后60min、120min,与电针对照组相比,电针组大鼠EMG振幅减弱,差异有统计学意义(P<0.05);但UCD后30min电针对照组与电针组间EMG振幅无明显差异。UCD后各时间点,电针对照组与UCD组相比,大鼠EMG振幅差异均无统计学意义(均P>0.05)。 UCD后60min,电针组大鼠脊髓胸腰段(T12 L2) Iba1反应阳性细胞数量较电针对照组显著减少,差异有统计学意义(P<0.05),但电针对照组与UCD组相比差异无统计学意义(P>0.05)。 结论: 1.脊髓小胶质细胞的活化参与了宫颈扩张所致急性内脏痛的形成; 2.电针刺激“合谷”“三阴交”缓解大鼠宫颈扩张的可能机制是抑制脊髓小胶质细胞的活化。