【摘 要】
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外源基因表达的不可预测性一直是制约转基因动物发展的主要技术瓶颈之一.多年的实验结果表明,定点整合技术和位点特异性重组技术的结合使用是解决这一难题的主导方向.该实验
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外源基因表达的不可预测性一直是制约转基因动物发展的主要技术瓶颈之一.多年的实验结果表明,定点整合技术和位点特异性重组技术的结合使用是解决这一难题的主导方向.该实验从这个角度出发,主要研究了在牛乳腺上皮细胞中对β-酪蛋白基因座位进行定点整合的可行性,为动物乳腺生物反应器的研制做了进一步的探索工作.首先,利用PCR技术从牛的基因组DNA中获得了构建打靶载体所需要的左、右同源臂,长度分别为1590bp和6371bp.其中1590bp的左同源臂包括β-酪蛋白基因的部分第1内含子,翻译起始密码子发生突变的第2外显子以及部分第2内含子,6371bp的右同源臂包括部分第1内含子、第2-8外显子、第2-7内含子以及部分第8内含子.将这两个同源片段分别克隆到pUCm-T载体上进行部分序列测定,并与牛β-酪蛋白基因进行同源性比较.结果表明,两个片段的同源性分别高达97﹪和99﹪,证明其能用于基因打靶实验.
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