莪术油对宫颈癌细胞E6基因表达影响的实验研究及保妇康栓治疗HPV感染临床研究

来源 :北京中医药大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:smarten
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目的:本研究拟从体外细胞学、分子生物学及临床疗效观察等多层面的对保妇康栓及其主要成份莪术油治疗宫颈HPV感染的有效性进行评价,并探讨其内在作用机制,为中医药预防治疗宫颈癌提供研究依据。方法:1.临床研究:将30例宫颈HPV感染的患者应用保妇康栓治疗,于月经干净2-5天,每晚睡前清洗外阴后,将保妇康栓置于阴道后穹隆深处,2粒/晚。每个月经周期用药20天,经期停药,连用3月经周期为1疗程,停药1个月后复查。与治疗前进行比较,分析患者治疗前后HPV转阴率及临床症状积分变化情况,对保妇康栓治疗宫颈HPV感染的临床疗效进行评价。2.实验研究:2.1细胞培养及细胞增殖曲线的测量:细胞接种后,培养24h,在SiHa细胞、HeLa细胞以及C33a细胞各组细胞中分别加入莪术油(0.001-1 mg/ml)和同样体积的空白溶剂(DMSO)。每种细胞设立3个平行对照,并设空白对照。通过MTS法检测该药对细胞增殖的影响,计算抑制率并选出最佳时效、量效点;2.2细胞中E6 mRNA的表达含量检测:在不同浓度莪术油处理后细胞中,提取总RNA,用Realtime-PCR检测HPV E6 mRNA在HPV16阳性细胞Siha中和HPV18阳性细胞Hela中的相对表达含量的差异。结果:1临床研究:30例患者通过保妇康栓治疗后,HPV转阴率为43.3%;治疗前后临床症状积分通过自身配对t检验后,t=8.595,P=0,差异有统计学意义,说明保妇康栓不仅能够有效的清除官颈HPV感染,而且能显著改善宫颈HPV感染患者的整体情况。2实验研究:用不同浓度莪术油作用于宫颈癌SiHa细胞、HeLa细胞以及C33a细胞,统计结果显示莪术油在0.1mg/ml时可以抑制三种宫颈癌细胞增长,在0.1mg/ml以下时不能明显抑制宫颈癌细胞增长。用Realtime-PCR检测结果显示,不同浓度莪术油处理前后HPV16E6 mRNA在Siha细胞中相对表达含量P值分别为0.1420、0.1216、0.0820、0.0734、0.0405,HPV18 E6 mRNA在Hela细胞中相对表达含量P值分别为0.1612、0.1327、0.0915、0.0632、0.0312,经统计分析后,其差异有统计学意义,P值均<0.05。结论1.根据文献可知,宫颈HPV感染有一定的自愈率。临床研究结果证实保妇康栓治疗官颈HPV感染临床疗效确切。保妇康栓治疗官颈高危型HPV感染不仅能够提高转阴率,而且可以改善患者整体状况,值得临床推广应用。2.莪术油在0.1mg/ml以上时可以抑制子宫颈癌增殖,且呈浓度依赖效应,其作用可能是通过抑制HPV16型和18型E6 mRNA的转录完成。
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