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目的探讨micro RNA-520d-5p在风湿性心脏病房颤患者心肌组织中的表达差异并进行验证,预测下游可能的靶基因,为寻求安全、有效治疗房颤的药物提供新的靶点。方法(1)经知情同意,采集风心病与瓣膜病瓣膜置换术患者右心耳心肌组织,共分为5组:①风心病合并房颤组(简称风心房颤组);②风心病无合并房颤组(简称风心无房颤组);③非风心瓣膜病组(简称瓣膜病组);④风心病房颤组+风心病无房颤组(简称风心病组);⑤风心无房颤组+瓣膜病组(简称无房颤组);(2)提取右心耳组织总RNA并质检合格后,应用Affymetrix micro RNA芯片检测分析风心房颤组、风心无房颤组、非风心病组中心肌组织micro RNAs表达谱的差异,筛选出表达差异显著的micro RNAs。(3)采用RT-PCR方法对筛选出的目的mi RNAs(hsa-mi RNA-520d-5p和hsa-mi RNA-4723)进行大样本量的组织验证;(4)应用生物信息学软件(Target Scan、mi RDB与micro RNA.org)预测hsa-mi RNA-520d-5p下游靶基因,并结合《人类基因功能手册》与NCBI平台筛选与房颤相关的靶基因并了解可能的作用机制。结果(1)Affymetrix micro RNA芯片检测结果:风心房颤组与风心无房颤组相比,6个micro RNAs表达上调,16个表达下调,其中hsa-mi R-4723明显上调,hsa-mi R-520d-5p明显下调;风心病组与非风心病组相比,46个micro RNAs表达上调,21个表达下调。(2)Real-time PCR验证结果:①hsa-mi R-520d-5p表达丰度在风心房颤组显著下调,与风心无房颤组相比差异有显著统计学意义(P<0.05),与非房颤组相比差异亦有统计学意义(P<0.05);而风心病组与非风心病组相比,二者hsa-mi R-520d-5p表达丰度差异无统计学意义(P>0.05)。②风心房颤组与风心无房颤组相比、风心房颤组与非房颤组相比、风心病组与非风心病组相比,hsa-mi R-4723表达差异均无统计学意义(P>0.05)。(3)micro RNA靶基因预测结果:Target Scan、micro RNA.org、mi RDB共同预测的has-mi R-520d-5p靶基因共有491个,其中可能与信号传导通路、心肌纤维化、胶原合成密切有关的基因39个,最终与房颤相关的靶基因确定有9个,包括:ADAM10/15/17、SMAD3、TEAD-1、COL1a1/3a1、Zeb2-Meox2、DLG5、PDE2、MEF2A、TGFβ。结论(1)风湿性心脏病房颤患者心肌组织的micro RNAs芯片表达谱明显异常。(2)经临床大样本验证,房颤患者心肌组织hsa-mi R-520d-5p表达水平显著下调,而hsa-mi R-4723表达水平无明显变化。(3)hsa-mi R-520d-5p可能通过调控ADAM10/15/17、SMAD3、TEAD-1、COL1a1/3a1、Zeb2-Meox2、DLG5、PDE2、MEF2A、TGFβ靶基因表达,影响信号传导通路、胶原代谢、心肌纤维细胞等从而参与房颤的发生与维持。