论文部分内容阅读
口蹄疫（foot and mouth disease, FMD） 是国际兽疫局（OIE） 发布的A 类家畜传染病之首,它主要感染偶蹄类动物,已经成为影响畜牧业发展的重要因素之一。对于口蹄疫疫苗的研究已开展多年,研究者们开发出各种疫苗,它们包括:灭活疫苗、减毒疫苗、亚单位疫苗、DNA 疫苗等。其中DNA 疫苗以具有安全、稳定、成本低,可同时激活体液及细胞免疫等众多优点而成为研究的热点之一。口蹄疫等病毒主要是通过飞沫,尘粒等以经过呼吸道、消化道等粘膜途径感染动物。粘膜系统是机体对抗此类外来致病微生物的第一道防线,起着至关重要的作用,所以可以引发机体粘膜部位免疫的疫苗是预防此类疾病的首选。传统经由肌肉注射的疫苗虽然可以引发机体的系统免疫,但很难激起粘膜部位的免疫反应。粘膜免疫是通过粘膜途径免疫动物,模仿动物的感染方式,能够很好的激起机体的粘膜抗体。但是经过粘膜途径免疫的抗原易被粘膜系统的纤毛,分泌液等清除,不能有效进入机体。如何发展一种粘膜免疫的介导物质,提高粘膜免疫抗原的递呈效果是粘膜免疫一直需要解决的问题。壳聚糖是一种带正电荷的具有粘膜粘附性的多糖,可以包裹质粒DNA 形成纳米颗粒。壳聚糖的正电荷性在粘膜表面的负电荷与DNA 疫苗的负电荷之间架起一座相互连接的桥梁,它可携带质粒通过粘膜途径进入动物细胞并且表达。所以,壳聚糖作为DNA 疫苗的粘膜发送系统受到广泛的关注。本研究首先针对壳聚糖分子量较大与质粒形成的纳米颗粒大小不均一,利用NaNO2 将壳聚糖降解成小分子。将小分子壳聚糖与质粒DNA 包裹形成纳米颗粒,并进行了一些性质的研究。小分子壳聚糖包裹质粒DNA 后,形成了颗粒,不能通过琼脂糖孔径,这可以通过琼脂糖电泳证明。通过透射电镜（TEM）和扫描电镜（SEM）的观察,证明了小分子壳聚糖与质粒DNA 能够形成颗粒大小在100 纳米左右,颗粒大小均一。通过Zate 电位检测证明电位高于原壳聚糖/DNA,即其颗粒的稳定性好于解聚前的壳聚糖/DNA。经过DNase 和小鼠胃液的消化试验,认为小分子壳聚可以一定程度的保护质粒DNA 抵抗DNase