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目的:体外环境下,探讨刺梨提取物CL联合金荞麦提取物FR对人脐静脉内皮细胞株ECV-304增殖及凋亡的影响。在体模型下,CL联合FR对鸡胚尿囊膜血管新生的影响。
方法:IC30浓度CL/FR单药和两药的1/2IC20浓度联合应用。MTT法检测ECV-304细胞的增殖抑制率;流式细胞术检测ECV-304细胞早期凋亡细胞比例;RT-PCR和Western blot法分析Ki-67及Bax、Bcl-2 mRNA/蛋白表达的变化。鸡胚尿囊膜法:计算经100μg/ml CL、100μg/ml FR、CL50μg/ml+FR50μg/ml联合作用后的7日龄鸡胚尿囊膜血管受抑制的百分率。
结果:CL、FR单药及联合使用时均明显抑制ECV-304细胞的生长,且呈剂量依赖性。48小时ECV-304细胞CL各浓度组(10μg/ml,40μg/ml,160μg/ml)的抑制率为10.67±0.83%,25.20±2.40%,47.33±4.51%,FR各浓度组(15μg/ml,60μg/ml,240μg/ml)的抑制率7.33±0.30%,34.27±2.31%,55.20±0.82%,差异均具统计学意义(P<0.05)。IC30浓度的CL(50μg/ml)、FR(60μg/ml)和1/2IC30CL+1/2IC30FR(25+30μg/ml),对ECV-304细胞的抑制率分别为30.9±1.17%,32.9±1.37%,43.7±1.53%,差异具有统计学意义(P<0.05)。流式细胞术结果表明正常对照组、单药组、联合用药组早期凋亡率依次增加,分别为5.12±0.28%,26.36±1.26%,29.27±2.39%42.71±2.07%,差异具统计学意义(P<0.05);与单独用药组比较,联合用药组Ki-67 Bcl-2mRNA/蛋白表达均显著降低(P<0.05),而Bax mRNA/蛋白表达均显著增高(P<0.05);鸡胚尿囊膜实验显示CL、FR单独和联合应用均可抑制鸡胚尿囊膜新生血管的生长,CL作用更明显。
结论:CL和FR单药及联合应用,均具抑制ECV-304细胞增殖并诱导其凋亡的作用,联合后上述作用存在协同现象,机制可能为两药协同下调了Ki-67、Bcl-2蛋白表达,上调了Bax蛋白的表达。分别单独及联合应用两药均明显抑制鸡胚尿囊膜血管生成,CL作用更明显。