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体外受精-胚胎移植(In vitro fertilization-Embryo transfer, IVF-ET)作为一项重要的辅助生殖技术(Assisted reproductive technology, ART)，在解决了诸多不孕不育夫妇生育难题的同时，也带来了新生儿不良妊娠结局及子代远期疾病发病的风险，胎盘作为连接胎儿与母体的一个重要桥梁器官，对母儿的围产期不良妊娠结局及子代的远期健康有着决定性的作用。有研究显示IVF-ET通过表观遗传调控引起一系列胎盘印记基因表达改变，可能导致了子代远期疾病发病风险增高；IVF-ET会导致妊娠晚期胎盘过度生长，但具体机制仍未阐明。本研究通过构建IVF-ET小鼠模型，拟从胎盘印记基因簇H19/IGF2的表达调节为切入点，从受体信号通路与表观遗传学水平揭示IVF-ET引起胎盘过度生长的机制，为促进和改善IVF-ET的体外操作提供理论支持和预警靶点，降低子代远期疾病的发病风险。
第一部分IVF-ET下调H19及其衍生的miR-675激活胰岛素样生长因子受体信号通路参与促进ICR小鼠妊娠晚期胎盘过度生长
目的：检测自然妊娠组(Control组)与体外受精-胚胎移植组(IVF-ET组)小鼠妊娠晚期胎盘H19及其衍生的miR-675表达水平，以及胰岛素样生长因子(IGFs)及其相关受体mRNA与蛋白表达水平，以印记基因H19/IGF2的表达调节为切入点，探讨IVF-ET引起小鼠妊娠末期胎盘过度生长的关联分子；
方法：构建IVF-ET小鼠模型，ICR小鼠进行超促排卵体外受精并培养至囊胚后，将囊胚移植入假孕3.5天(Day)的小鼠子宫内，收集妊娠16.5天(D16.5)与妊娠18.5天(D18.5)胎鼠及胎盘为实验组，收集自然妊娠小鼠D16.5、D18.5胎鼠及胎盘为对照组；称重并比较IVF-ET组小鼠胎盘与Control组小鼠胎盘在妊娠16.5天(D16.5)与妊娠18.5天(D18.5)的胎盘重量与胎盘效率；q-RT-PCR检测两组胎盘H19及其衍生的miR-675表达水平，IGFs及其受体表达水平。
结果：1.IVF-ET组小鼠胎盘重量D16.5、D18.5显著高于Control组，胎盘效率显著低于Control组，差异有统计学意义(P＜0.05)；2.IVF-ET组小鼠胎盘H19及其衍生的miR-675于D16.5、D18.5相对表达量显著低于Control组，差异有统计学意义(P＜0.05)；3.IVF-ET组小鼠胎盘IGFs及其受体mRNAD16.5、D18.5的相对表达量显著高于Control组，差异有统计学意义(P＜0.05)。
结论：IVF-ET是引起胎盘重量与胎盘效率相对于Control组改变的重要因素，此结果说明IVF-ET可能通过下调H19及其衍生的miR-675激活了IGFs信号通路参与促进了小鼠妊娠末期胎盘的过度生长。
第二部分IVF-ET通过激活胰岛素样生长因子受体及其下游磷酸化PI3K/Akt/mTOR信号通路促进ICR小鼠胎盘过度生长
目的：检测两组胎盘胰岛素样生长因子(IGFs)及其相关受体蛋白表达水平与下游信号通路PI3K/Akt/mTOR相关蛋白表达水平，从受体信号通路水平探讨IVF-ET致小鼠妊娠末期胎盘过度生长的机制；
方法：Elisa与Western检测两组胎盘IGF1与IGF2及其受体蛋白表达水平与其下游PI3K/Akt/mTOR信号通路相关蛋白表达水平。
结果：1.IVF-ET组小鼠胎盘D18.5天IGF1与IGF2蛋白表达水平显著高于Control组，差异有统计学意义(P＜0.05)；2.IVF-ET组小鼠胎盘D18.5天IGFs受体蛋白表达水平显著高于Control组，差异有统计学意义(P＜0.05)；3.IVF-ET组小鼠胎盘D18.5天IGFs受体下游磷酸化PI3K/Akt/mTOR信号通路相关蛋白相对表达量显著高于Control组，差异有统计学意义(P＜0.05)。
结论：IVF-ET通过下调H19及其衍生的miR675激活了IGFs信号通路及其下游磷酸化PI3K/Akt/mTOR信号通路参与促进了小鼠妊娠末期胎盘的过度生长。
第三部分IVF-ET通过上调H19-ICR区甲基化水平降低小鼠妊娠末期胎盘H19表达水平
目的：从印记基因的表观遗传调控途径探讨IVF-ET引起小鼠妊娠末期胎盘父源性印记基因H19表达水平降低的机制。
方法：BSP直接与克隆测序检测两组胎盘D18.5的H19-ICR区甲基化水平。
结果：1.IVF-ET组小鼠D18.5胎盘H19-ICR区总甲基化水平显著高于Control组，差异有统计学意义(P＜0.05)；2.IVF-ET组小鼠D18.5胎盘H19-ICR区各CpG位点平均甲基化水平显著高于Control组，差异有统计学意义(P＜0.05)。
结论：IVF-ET操作引起小鼠D18.5胎盘H19-ICR过甲基化。
第四部分IVF-ET通过上调甲基化酶Dnmt3b表达水平及与H19-ICR区结合水平致H19-ICR区过甲基化引起妊娠末期胎盘H19表达下调
目的：探讨IVF-ET对小鼠妊娠末期胎盘父源性印记基因H19的表观遗传调控的机制。
方法：q-RT-PCR与Western检测两组胎盘甲基化酶类mRNA及蛋白水平；Chipq-PCR检测Dnmt3b与H19-ICR区的结合丰度。
结果：1.IVF-ET组小鼠D18.5胎盘甲基化酶Dnmt3b表达水平显著高于Control组，差异有统计学意义(P＜0.05)；2.IVF-ET组小鼠D18.5胎盘甲基化酶Dnmt3b与H19-ICR区的结合丰度显著高于Control组差异有统计学意义(P＜0.05)。
结论：IVF-ET通过上调小鼠D18.5胎盘Dnmt3b的表达水平及其与H19-ICR区的结合水平使H19-ICR过甲基化，下调H19的表达，引起小鼠妊娠末期胎盘的过度生长。
第一部分IVF-ET下调H19及其衍生的miR-675激活胰岛素样生长因子受体信号通路参与促进ICR小鼠妊娠晚期胎盘过度生长
目的：检测自然妊娠组(Control组)与体外受精-胚胎移植组(IVF-ET组)小鼠妊娠晚期胎盘H19及其衍生的miR-675表达水平，以及胰岛素样生长因子(IGFs)及其相关受体mRNA与蛋白表达水平，以印记基因H19/IGF2的表达调节为切入点，探讨IVF-ET引起小鼠妊娠末期胎盘过度生长的关联分子；
方法：构建IVF-ET小鼠模型，ICR小鼠进行超促排卵体外受精并培养至囊胚后，将囊胚移植入假孕3.5天(Day)的小鼠子宫内，收集妊娠16.5天(D16.5)与妊娠18.5天(D18.5)胎鼠及胎盘为实验组，收集自然妊娠小鼠D16.5、D18.5胎鼠及胎盘为对照组；称重并比较IVF-ET组小鼠胎盘与Control组小鼠胎盘在妊娠16.5天(D16.5)与妊娠18.5天(D18.5)的胎盘重量与胎盘效率；q-RT-PCR检测两组胎盘H19及其衍生的miR-675表达水平，IGFs及其受体表达水平。
结果：1.IVF-ET组小鼠胎盘重量D16.5、D18.5显著高于Control组，胎盘效率显著低于Control组，差异有统计学意义(P＜0.05)；2.IVF-ET组小鼠胎盘H19及其衍生的miR-675于D16.5、D18.5相对表达量显著低于Control组，差异有统计学意义(P＜0.05)；3.IVF-ET组小鼠胎盘IGFs及其受体mRNAD16.5、D18.5的相对表达量显著高于Control组，差异有统计学意义(P＜0.05)。
结论：IVF-ET是引起胎盘重量与胎盘效率相对于Control组改变的重要因素，此结果说明IVF-ET可能通过下调H19及其衍生的miR-675激活了IGFs信号通路参与促进了小鼠妊娠末期胎盘的过度生长。
第二部分IVF-ET通过激活胰岛素样生长因子受体及其下游磷酸化PI3K/Akt/mTOR信号通路促进ICR小鼠胎盘过度生长
目的：检测两组胎盘胰岛素样生长因子(IGFs)及其相关受体蛋白表达水平与下游信号通路PI3K/Akt/mTOR相关蛋白表达水平，从受体信号通路水平探讨IVF-ET致小鼠妊娠末期胎盘过度生长的机制；
方法：Elisa与Western检测两组胎盘IGF1与IGF2及其受体蛋白表达水平与其下游PI3K/Akt/mTOR信号通路相关蛋白表达水平。
结果：1.IVF-ET组小鼠胎盘D18.5天IGF1与IGF2蛋白表达水平显著高于Control组，差异有统计学意义(P＜0.05)；2.IVF-ET组小鼠胎盘D18.5天IGFs受体蛋白表达水平显著高于Control组，差异有统计学意义(P＜0.05)；3.IVF-ET组小鼠胎盘D18.5天IGFs受体下游磷酸化PI3K/Akt/mTOR信号通路相关蛋白相对表达量显著高于Control组，差异有统计学意义(P＜0.05)。
结论：IVF-ET通过下调H19及其衍生的miR675激活了IGFs信号通路及其下游磷酸化PI3K/Akt/mTOR信号通路参与促进了小鼠妊娠末期胎盘的过度生长。
第三部分IVF-ET通过上调H19-ICR区甲基化水平降低小鼠妊娠末期胎盘H19表达水平
目的：从印记基因的表观遗传调控途径探讨IVF-ET引起小鼠妊娠末期胎盘父源性印记基因H19表达水平降低的机制。
方法：BSP直接与克隆测序检测两组胎盘D18.5的H19-ICR区甲基化水平。
结果：1.IVF-ET组小鼠D18.5胎盘H19-ICR区总甲基化水平显著高于Control组，差异有统计学意义(P＜0.05)；2.IVF-ET组小鼠D18.5胎盘H19-ICR区各CpG位点平均甲基化水平显著高于Control组，差异有统计学意义(P＜0.05)。
结论：IVF-ET操作引起小鼠D18.5胎盘H19-ICR过甲基化。
第四部分IVF-ET通过上调甲基化酶Dnmt3b表达水平及与H19-ICR区结合水平致H19-ICR区过甲基化引起妊娠末期胎盘H19表达下调
目的：探讨IVF-ET对小鼠妊娠末期胎盘父源性印记基因H19的表观遗传调控的机制。
方法：q-RT-PCR与Western检测两组胎盘甲基化酶类mRNA及蛋白水平；Chipq-PCR检测Dnmt3b与H19-ICR区的结合丰度。
结果：1.IVF-ET组小鼠D18.5胎盘甲基化酶Dnmt3b表达水平显著高于Control组，差异有统计学意义(P＜0.05)；2.IVF-ET组小鼠D18.5胎盘甲基化酶Dnmt3b与H19-ICR区的结合丰度显著高于Control组差异有统计学意义(P＜0.05)。
结论：IVF-ET通过上调小鼠D18.5胎盘Dnmt3b的表达水平及其与H19-ICR区的结合水平使H19-ICR过甲基化，下调H19的表达，引起小鼠妊娠末期胎盘的过度生长。