为了建立一种能够实现生物活体示踪的狂犬病病毒（RABV）,以有效地研究RABV的侵染机制,本研究基于重组RABV r ERA载体,利用反向遗传技术构建了包含r ERA全长基因组cDNA及萤火虫荧光素酶（Luc）基因的重组质粒,并经Pme I酶切鉴定正确后,将该质粒与辅助质粒共转染BSR细胞,4 d后收集上清液,在BSR细胞上盲传3代后收集上清液作为种毒进行鉴定,RT-PCR扩增结果显示获得了Luc基因的目的条带;IFA鉴定结果显示,重组病毒与亲本病毒感染的细胞出现绿色荧光;将重组病毒纯化后电镜观察结果显示重组病毒与亲本病毒均呈弹头状,Western blot结果显示重组病毒与亲本病毒蛋白表达情况一致,将重组病毒命名为r ERA-Luc。将重组病毒在体外连续传15代,每代均经PT-PCR及测序鉴定,经IFA测定病毒滴度,研究其遗传为定性,同时经Dual-Luciferase（?）Reporter 1000 Assay System处理样品后测定各代次重组病毒的荧光素酶活性。各代次重组病毒的RT-PCR及测序结果显示未发生基因突变;IFA结果显示F5代后重组病毒与亲本病毒在体外的病毒滴度无显著差异并能稳定传代至15代;重组病毒荧光素酶活性随时间变化逐渐升高且从第5代以后,各代次重组病毒均能够稳定表达荧光素酶,亲本病毒一直维持较低荧光素酶活性。将重组病毒与亲本病毒分别感染BSR细胞和NA细胞,经IFA测定不同时间的病毒滴度,绘制生长曲线并对荧光素酶活性进行测定,结果显示重组病毒与亲本病毒在体外的生长特性无显著差异;重组病毒荧光素酶活性随时间变化逐渐升高,亲本毒株一直维持较低荧光素酶活性,说明Luc基因的插入未影响重组病毒的生长特性。将重组病毒和亲本毒株以104 ffu/只的剂量分别经肌肉注射（i.m.）和颅内接种（i.c.）6周龄BALB/c SPF级小鼠,同时设置这两种途径接种的PBS对照组,分别记录小鼠的体质量（i.m.组）和观察小鼠的临床症状（i.c.组）。结果显示,重组病毒i.m.组小鼠与亲本病毒i.m.组小鼠的体质量变化保持一致,重组病毒i.c.组小鼠的临床症状以及生存率与亲本病毒i.c.组小鼠临床症状以及生存率无显著差异,而对照组小鼠均无临床症状,结果表明Luc基因的插入并不影响病毒的致病力。本研究构建的重组病毒r ERA-Luc,为研究RABV的致病机制奠定了基础。