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目的:探讨survivin siRNA、HSP70双基因转染对肝癌细胞系HepG2内源survivin、HSP70表达的影响,为进一步深入研究survivin siRNA、HSP70双基因对肝癌细胞系HepG2生物学特性的影响奠定实验基础。
方法:1、常规培养肝癌细胞系HepG2。2、将已构建的真核表达载体(pLRES2-EGFP-survivin siRNA、plRES2-EGFP-HSP70)用脂质体介导转染肝癌细胞系HepG2,转染72小时,收集各组细胞,利用倒置荧光显微镜观察转染后的细胞,通过RT-PCR、western-blot检测转染后细胞中survivin mRNA、survivin蛋白及HSP70蛋白表达的变化。
结果:1、转染真核表达载体与转染空载体的肝癌细胞系HepG2于倒置荧光显微镜下可见绿色荧光。2、转染真核表达载体的HepG2细胞与转染空载体的HepG2细胞和未转染的HepG2细胞相比,survivin mRNA和sur-vivin蛋白表达水平降低,而HSP70蛋白表达升高。
结论:1、survivin siRAN与HSP70双基因转染成功。2、survivin siRNA能干扰HepG2内源survivin的表达,HSP70能上调HepG2细胞HSP70蛋白的表达。