丹川红吸收成分舒血管机理研究

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目的:通过观察丹川红及其吸收成分FTA单用(Ferulic acid/阿魏酸、Tanshinol/丹参素和Hydroxysafflor yellow A/羟基红花色素A)对大鼠离体胸主动脉环及大鼠胸主动脉内皮细胞的作用,进一步探讨丹川红的舒血管机理。方法:建立UPLC-MS/MS方法对丹川红及其灌胃大鼠吸收入血成分进行分析测定。采用离体血管张力实验方法记录丹川红及其吸收成分单用对1μmol/L肾上腺素(PE)预收缩血管环张力变化。化学发光法测定丹川红吸收成分对内皮细胞一氧化氮(NO)及一氧化氮合酶(NOS)含量的影响。采用western E迹和RT-PCR法分析丹川红吸收成分对内皮细胞PI3K/AKT/eNOS信号通路的影响。结果:第一部分:丹川红及其灌胃大鼠血浆中FTA能被同时检测到并作为该方的体内主要吸收活性成分(ABCs)。第二部分:丹川红及其三个吸收成分FTA对苯肾上腺素(PE)预收缩的离体大鼠胸主动脉环均有明显的浓度依赖性舒张效应。DCH对完整和去内皮主动脉环最大舒张分别为82±3%和76±2%(P<0.01和P<0.05)。F对完整和去内皮主动脉环最大舒张分别为94±4%和85±3%(P<0.01和P<0.01)。T对完整和去内皮主动脉环最大舒张分别为96±4%和9士1%(P<0.01和P>0.05)。A对完整和去内皮主动脉环最大舒张分别为92±4%和81±2%(P<0.01和P<0.05)。第三部分:与对照组相比FTA单用与内皮细胞共同孵育24h后,细胞内tNOS活性分别增加至161.50±1.69、258.25±3.19和322.27±3.67U/mL(P<0.05, P<0.01和P<0.01)。与对照组相比T、A预处理的血管内皮细胞内iNOS活性分别降低为4.63±0.46和5.26±0.28U/mL(P<0.01和P<0.05);F预处理组细胞内iNOS活性无明显降低为5.99±0.29U/mL(P>0.05)。与对照组相比FTA单用预处理细胞后培养液中NO含量均明显增加,分别为686.74±44.73、817.66±85.38和1064.33±115.91μmol/L(P<0.05, P<0.01和P<0.01)。第四部分:吸收成分T、A组细胞内AKT相对蛋白含量与对照组相比增加较明显(P<0.01和P<0.01);F组与对照组相比细胞内AKT相对蛋白含量无明显增加(P>0.05)。与对照组相比FTA单用于细胞后,三者均能明显促进细胞内AKT蛋白磷酸化变化(P<0.01,P<0.01和P<0.01)。FTA分开作用于细胞后,三个组中细胞内eNOS相对蛋白含量均高于对照组(P<0.01,P<0.01和P<0.01),与对照组相比FTA单用三个组中细胞内磷酸化eNOS蛋白含量升高(P<0.01,P<0.01和P<0.01)。结论:FTA是丹川红主要吸收药效成分,丹川红及其FTA单用对血管环收缩均有抑制作用,T主要通过内皮依耐产生舒血管作用。F、A的舒血管作用是内皮依赖性和非内皮依赖性联合作用的结果。FTA通过作用PI3K/Akt途径增加NO释放,促进血管舒张。
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