背景及目的：RNAi在HIV-1的治疗研究中得到了广泛的应用,构建高效并且安全的RNAi抗病毒元件是开展相关研究的基础。siRNAs或miRNAs可以特异地结合靶mRNA，引起靶mRNA降解或翻译抑制，最终导致基因特异性沉默。辅助受体（CCR5或CXCR4）是HIV进入被感染细胞所必需的。研究发现，基因CCR5delta32序列缺失可以减缓或抵抗HIV-1感染，但机体未出现免疫异常。基因vif是感染性因子，可能影响游离HIV感染性、病毒体的产生和体内传播。基因pol编码多种酶，如逆转录酶，蛋白酶，对HIV的复制有重要作用。本实验分别以ccr5，vif，pol为靶基因，构建miRNA,从中筛选出来基因效率较高的miRNAs。方法：第一步，选择保守型较好的ccr5，vif，pol基因为靶区，合成基因序列，克隆入载体，转染293T细胞，最后通过qPCR筛选高效表达ccr5、vif和pol基因的293T细胞。第二步，根据基因序列设计引物并分别合成针对ccr5、vif和pol基因的人工miRNA各4对。第三步，以天然miR-155为基础骨架构建了分别靶向ccr5，vif，pol的人工miRNA元件，通过与HIV-1感染性克隆质粒的共转染抑制实验验证获得了可有效抑制HIV-1表达的人工miRNA元件。通过与携带靶序列的报告质粒的共转染实验证明ccr5-miRNA，vif-miRNA和pol-miRNA具有良好的沉默效果。结果：通过干扰效果评价，得到了干扰效果较强的ccr5-miRNA、vif-miRNA和pol-miRNA，其对靶基因的干扰效果分别达到了72%、68%和76%。结论：得到了高效表达ccr5，vif，pol基因的293T细胞；构建和筛选到了各种基因沉默效率最好的miRNA，其干扰效率分别为72%、68%和76%。