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胃癌是世界范围内最为常见和死亡率较高的恶性肿瘤之一，特别是在我国的东南沿海地区。在查阅文献和本中心实验室原有工作的基础上，本研究应用免疫组织化学、真核载体转染、Western blot、流式细胞术、ELISA、实时荧光定量PCR等技术，初步探讨了丙酮酸激酶M2型(肿瘤M2丙酮酸激酶，PKM2)对胃腺癌细胞增殖和凋亡的作用及初步机制，为临床胃腺癌治疗寻找可能的药物作用靶点奠定基础。第一部分应用免疫组化技术分别测定PKM2和IL-6在113例胃腺癌组织和同一患者的癌旁组织样本中的表达，分析胃腺癌组织中是否存在PKM2过表达及其与患者临床病理特征、生存期的关系。结果表明：在113例胃腺癌组织样本中， PKM2过表达率为61.9%（70/113）；IL-6过表达率为61.1%（69/113）。1、PKM2在胃腺癌组织中表达明显高于配对的癌旁组织样本中的表达，两者差异具有统计学意义(P=9.96×10-5)。2、PKM2在胃腺癌中组织中的过表达和患者的性别、年齡、分化程度、腺癌的组织学类型、远处转移无统计学意义，但与肿瘤大小、肿瘤TMN分期、侵袭至浆膜外、淋巴结转移密切相关，特别与患者的存活显著相关（P=4.78×10-4)。3、患者的存活和性别、年齡、分化程度、腺癌的组织学类型无关，但与肿瘤大小、肿瘤TMN分期、侵袭及浆膜外、淋巴结转移、远处转移、PKM2过表达密切相关。4、COX模型和K-M曲线生存分析：PKM2在胃腺癌和癌旁组织中的过表达差值是1+、2+、3+的患者死亡风险分别是未过表达患者的2.66倍（HR，2.66，95%CI，0.92to7.69；P=0.071）、10.01倍（HR，10.01，95%CI，0.92to7.69；P=2.55×10-5）、18.74倍（HR，18.74，95%CI，3.43to29.25；P=1.64×10-5），并且过表达程度越高，风险也就越高； PKM2过表达患者与未过表达患者之间生存时间差异具有统计学意义（Log Rank P=1.05×10-5），中位生存时间（MST）从67.0月锐减为35.0月。5、PKM2和IL-6在胃腺癌组织中的过表达相关分析证明两者高度相关(R=0.678，P=2.05×10-5)。第二部分应用RT-PCR的方法从胃癌组织的总RNA中扩增全长PKM2基因的cDNA，以BamHⅠ酶切位点克隆入pDsRed-Express-C1真核表达载体，经测序证明所构建的载体正确无误后，再以脂质体方法(Lipofectamine2000)分别转染入AGS和MKN-45胃腺癌细胞株中，Western-blot检测并筛选出PKM2蛋白表达最高的PKM2的细胞，结果表明成功地构建了人pDsRed-Express-C1-PKM2真核表达载体，并且成功地获得了PKM2过表达的AGS和MKN-45细胞株，从而保证了后续的研究。第三部分PKM2对胃腺癌细胞增殖和凋亡作用及机制的初步研究。应用MTT试验测定细胞增殖、Annexin V染色+流式细胞术测定细胞凋亡、ELISA实验测定IL-6浓度、实时荧光定量PCR检测IL-6mRNA表达，分析PKM2过表达对胃腺癌细胞的影响(以未转染和转染空载体为对照)。胃腺癌细胞株AGS和MKN-45PKM2过表达组（转染pDsRed-Express-C1-PKM2）细胞增殖能力明显高于空载体组（转染pDsRed-Express-C1）细胞(control)，差异具有统计学意义（AGS，P=0.031；MKN-45，P=0.038）；PKM2过表达组细胞凋亡率明显低于转染空载体组细胞(control)，差异均具有显著意义（AGS，P=4.06×10-4；MKN-45，P=0.001）；PKM2过表达组细胞IL-6蛋白分泌增加和IL-6mRNA表达上调。PKM2过表达对胃腺癌细胞增殖和凋亡的影响与IL-6刺激组所得的结果相似。我们得到了初步结论：胃腺癌细胞AGS和MKN-45过表达PKM2后，通过增加IL-6的mRNA及蛋白表达，使肿瘤细胞增殖增强和凋亡减少。