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研究目的:1.研究细胞骨架完整性在流体剪切力诱导成骨细胞COX—2基因表达中的作用。
2.研究RNA干扰抑制细胞骨架改建对流体剪切力下成骨细胞COX—2基因力学敏感性的影响。
研究方法:
原代培养BALB/c小鼠颅骨成骨细胞,采用细胞松弛素D破坏细胞骨架的完整性或采用RNA干扰沉默LIMK2基因抑制细胞骨架改建;以12 dyne/c㎡流体剪切力对成骨细胞加载1.5h,分别应用实时荧光定量巢式PCR和免疫荧光的方法检测COX—2基因mRNA和蛋白的表达水平,并对结果进行双因素方差分析。
结果:
1.采用细胞松弛素D破坏细胞骨架的完整性,可以对流体剪切力诱导成骨细胞COX—2 mRNA和蛋白的表达起拮抗作用(P<0.05);在无流体剪切力加载条件下,细胞松弛素D处理对COX—2 mRNA和蛋白的表达水平无显著影响(P>0.05);流体剪切力加载1.5h能使成骨细胞COX—2 mRNA和蛋白的表达水平显著升高(P<0.05);细胞松弛素D处理可显著降低流体剪切力诱导成骨细胞COX—2 mRNA和蛋白的表达水平(P<0.05)。
2.采用RNA干扰抑制细胞骨架改建,可以对流体剪切力诱导成骨细胞COX—2mRNA和蛋白的表达起协同作用(P<0.05);在无流体剪切力加载条件下,RNA干扰处理对COX—2 mRNA和蛋白的表达水平无显著影响(P>0.05);流体剪切力加载1.5h能使成骨细胞COX—2 mRNA和蛋白的表达水平显著升高(P<0.05);RNA干扰处理可显著提高流体剪切力诱导成骨细胞COX—2mRNA和蛋白的表达水平(P<0.05)。
结论:
1.保持成骨细胞细胞骨架的完整性是流体剪切力诱导COX—2基因表达过程中所必需的。
2.采用RNA干扰抑制细胞骨架改建,可以提高流体剪切力作用下成骨细胞COX—2基因的力学敏感性。