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目的:橙皮素（Hesperetin,HES）是一种芸香科柑橘属的二氢类天然产物,具有抗高尿酸血症等多种药理作用,急需开发新的检测方法来研究HES在体内外的代谢过程。本文建立了超高效液相-质谱联用法（Ultra performance liquid chromatography/tandem mass spectrometry,UPLC-MS/MS）及电化学法研究HES在正常及高尿酸血症大鼠中的药代动力学,为HES的作用机理和临床应用提供方法学支持和理论依据。方法:1.建立UPLC-MS/MS法检测大鼠血清中的HES。使用Excel2 C18-PFP反相色谱柱（2μm,2.1 mm×100 mm）进行色谱分析,柱温40℃;流动相0.1%甲酸-甲醇,梯度洗脱。质谱采用正离子扫描方式,多反应监测;离子化方式为电喷雾离子化源,温度300℃;电离电压:4.0 kV;鞘气使用氮气,流量为11 L/min;用于定量分析的离子反应分别为m/z 303.1→m/z 153.1（HES）,m/z 295.1→m/z 241.1（内标,艾司唑仑）。样本处理采用甲基叔丁基醚进行液液萃取,进样量5μL。2.建立电化学方法检测大鼠尿液中的HES。采用滴涂法制备山梨酸钾衍生多孔碳材料-900（Potassium sorbate inter-connectted porous carbon-900,PSIPC-900）修饰电极;使用循环伏安法（Cyclic voltammetry,CV）及示差脉冲伏安法（Differential pulse voltammetry,DPV）分别考察PSIPC-900分散液浓度、酸碱度值（Power of hydrogen,pH）、扫描速率对HES检测的影响,以探索最优条件。并考察HES电化学检测的线性范围、检出限、重现性及稳定性,以证明电化学方法检测HES的灵敏度与特异度。3.UPLC-MS/MS法比较正常和高尿酸血症大鼠中HES的药代动力学。将40只SD大鼠随机分为正常组（A组）和高尿酸血症组（B、C、D和E组）,正常组（A组）连续灌胃0.25%羧甲基纤维素钠（Carboxymethylcellulose sodium,CMC-Na）28天,第28天灌胃给予27 mg/kg HES,B、C、D、E组连续灌胃1.5 g/kg的氧酸钾和0.1 g/kg的腺嘌呤28天,每日一次,以建立高尿酸血症模型。其中B、C、D组于第28天分别灌胃给予9、27、81 mg/kg HES,E组连续灌胃27 mg/kg HES 28天,每日一次。各组在第28天给予HES前后的11个不同时间点采集血样,通过UPLC-MS/MS法测定血浆中HES含量。结果:1.UPLC-MS/MS中,HES和艾司唑仑的保留时间分别为3.41min和2.97 min,HES在0.1-100 ng/mL范围内具有线性关系,回归方程为y=0.170236 x+0.013848（R2=0.999）,定量限为0.1 ng/mL.电化学方法中,PSIPC-900修饰浓度为1.0 g/L,pH=2时,对HES的电化学响应最强;在最优条件下进行方法学考察,HES浓度在0.05-15μmol/L（15.1-4534.4 ng/mL）范围内呈线性关系,线性拟合方程为ipa=8.293 c+2.268（R2=0.999）,灵敏度为116.4 A?mol/L-1?cm-2,定量限为0.05μmol/L,检出限为0.021μmol/L（6.3 ng/mL）。2.高尿酸血症组的血尿酸水平从91.1±3.4 mmol/L增加到227.2±5.3 mmol/L,表明慢性高尿酸血症造模成功。与正常大鼠相比,高尿酸血症大鼠给予HES后AUC0–t和Tmax显著升高（p<0.05）,Cmax和CL显著降低（p<0.05）。连续给予HES 28天后E组的Cmax显著高于单次给药的C组（p<0.05）。结论:1.本研究成功建立了UPLC-MS/MS法及电化学法测定橙皮素的含量。电化学法仪器试剂成本低廉、样本处理方法简单、响应速度快及检测范围广,适合应用于橙皮素在生物样本中的初步分析;UPLC-MS/MS法灵敏度高,运行时间短,检出限低,适合于多组分的中草药和复杂生物样本中橙皮素的微量测定及药代动力学研究。本研究建立的两种方法为HES含量测定提供了新的思路,同时为HES药理研究提供了新的实验依据。2.高尿酸血症会改变HES药代动力学,经HES长期治疗后其药代参数趋于正常。其机制可能是高尿酸血症导致肠道和肾脏损伤,改变了代谢酶和转运蛋白表达,而HES具有肠道和肾脏保护作用。该研究可为HES的作用机理和临床应用提供更多有益的信息。