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目的:检测重组人IL-17D（RhIL-17D）作用下,卵巢癌SKOV3细胞和si-p65-SKOV3细胞NF-κB-p65和PD-L1 m RNA及蛋白的表达情况;检测RhIL-17D对SKOV3细胞和si-p65-SKOV3细胞迁移、侵袭、增殖的影响。探究IL-17D对卵巢癌细胞PD-L1表达和生物学特性的影响及其机制。方法:1.选取处于对数生长期的SKOV3细胞,以适量细胞接种于六孔板,用含不同浓度（0ng/ml、0.1ng/ml、1ng/ml、10ng/ml、100ng/ml）RhIL-17D的10%胎牛血清培养基培养细胞48小时,并收集细胞。2.应用实时荧光定量反转录多聚核苷酸酶链式反应（Quantitative re al-time reverse transcription polymerase chain reaction,qRT-PCR）方法检测在不同浓度RhIL-17D作用下,SKOV3细胞NF-κB-p65和PD-L1 m RNA相对表达量的变化。3.应用Western blot方法检测不同浓度的RhIL-17D对SKOV3细胞PD-L1和NF-κB-p65的活化形式P-p65蛋白表达水平的影响。并根据qRT-PCR和Western blot结果,选取目的基因表达最高的浓度进行后续试验。4.构建si-p65-SKOV3细胞系:用si-p65转染卵巢癌SKOV3细胞,同时设置si-NC对照组和空白对照组,分别应用qRT-PCR法和Western b lot法检验敲低效率。5.应用qRT-PCR方法检测RhIL-17D对si-p65-SKOV3细胞p65和P D-L1 m RNA表达水平的影响。6.应用Western blot方法检测RhIL-17D对si-p65-SKOV3细胞p65和PD-L1蛋白表达水平的影响。7.应用MTS增殖实验分别检测RhIL-17D对SKOV3细胞和si-p65-SKOV3细胞增殖能力的影响,并绘制生长曲线。8.应用划痕实验分别检测RhIL-17D对卵巢癌SKOV3细胞和si-p65-SKOV3细胞迁移能力的影响。9.应用Transwell小室侵袭实验分别检测RhIL-17D对卵巢癌SKOV3细胞和si-p65-SKOV3细胞侵袭能力的影响。结果:1.qRT-PCR结果显示:经过含不同浓度（0ng/ml、0.1ng/ml、1ng/ml、10ng/ml、100ng/ml）RhIL-17D的10%胎牛血清培养基培养,SKOV3细胞的p65 m RNA相对表达量分别为1.00±0.09、1.08±0.56、1.43±0.42、4.59±0.85、4.42±0.96,差异有统计学意义（P<0.01）。组间比较,0ng/ml组、0.1ng/ml组和1ng/ml组p65 m RNA表达水平显著低于10ng/ml组和100ng/ml组（P<0.05）。0ng/ml组、0.1ng/ml组和1ng/ml组中p65 m RN A表达水平的差异不具有统计学意义（P>0.05）。10ng/ml与100ng/ml组p65 m RNA表达水平的差异不具有统计学意义（P>0.05）。SKOV3细胞PD-L1 m RNA相对表达水平分别为1.00±0.02、1.00±0.15、1.00±0.38、2.20±0.36、2.33±0.64,差异有统计学意义（P<0.01）。组间比较,0ng/ml组、0.1ng/ml组和1ng/ml组PD-L1 m RNA表达水平明显低于10ng/ml和100ng/ml组（P<0.05）。0ng/ml、0.1ng/ml、1ng/ml组P D-L1 m RNA表达水平的差异不具有统计学意义（P>0.05）。10ng/ml与100ng/ml组PD-L1 m RNA的表达水平的差异不具有统计学意义（P>0.05）。2.Western blot结果显示,RhIL-17D可上调卵巢癌SKOV3细胞Pp65蛋白和PD-L1蛋白的表达,且呈浓度依赖性。根据以上结果,浓度为10ng/ml的RhIL-17D使目的基因表达最高,因此选用10ng/ml RhIL-17D作为后续处理浓度。3.成功设计并合成si-p65-SKOV3细胞,qRT-PCR方法结果显示,si-p65-SKOV3细胞组的p65 m RNA相对表达量低于si-NC-SKOV3细胞组和空白对照组（0.43±0.13 vs 1.02±0.26 vs 1.01±0.29,P<0.05）。Western blot显示si-p65-SKOV3细胞组P-p65蛋白表达明显低于siNC-SKOV3细胞组和空白对照组。4.qRT-PCR法结果显示,在10ng/ml RhIL-17D作用下,si-p65-SKO V3细胞组的p65 m RNA相对表达量显著低于si-NC-SKOV3细胞组和空白对照组,差异具有统计学意义（0.34±0.10 vs 1.02±0.23 vs 1.09±0.23,P<0.01）。si-p65-SKOV3细胞组PD-L1 m RNA相对表达量显著低于si-NC-SKO V3细胞组和空白对照组,差异具有统计学意义（0.51±0.15 vs 1.13±0.29vs 0.98±0.16,P<0.05）。5.Western blot方法结果显示,在10ng/ml RhIL-17D作用下,si-p65-SKOV3细胞组的P-p65和PD-L1蛋白表达量明显低于si-NC-SKOV3细胞组和空白对照组。6.MTS实验结果示,10ng/ml RhIL-17D组SKOV3细胞的增殖能力强于0ng/ml RhIL-17D组（P<0.05）。敲低p65基因后,在10ng/ml RhIL-17D作用下,si-p65-SKOV3细胞增殖能力低于si-NC-SKOV3细胞（P<0.05）。7.划痕实验结果示,10ng/ml RhIL-17D组SKOV3细胞的迁移能力显著大于0ng/ml RhIL-17D组（12h:21.79±1.65%vs 12.25±4.01%,P<0.01;24h:37.07±5.46%vs 25.12±6.81%,P<0.01）。敲低p65基因后,在10ng/ml RhIL-17D作用下,si-p65-SKOV3细胞的迁移能力小于si-NC-SKOV3细胞（12h:14.19±5.24%vs 24.43±3.31%,P<0.01;24h:26.50±5.25%vs 37.23±6.02%,P<0.05）。8.Transwell小室侵袭实验结果示,10ng/ml RhIL-17D组细胞穿膜数大于0ng/ml RhIL-17D组（147.25±27.26 vs 107.25±22.92,P<0.01）。敲低p65基因后,在10ng/ml RhIL-17D作用下,si-p65-SKOV3组细胞穿膜数显著少于si-NC-SKOV3组（87±27.46 vs 169±24.07,P<0.01）。结论:1.RhIL-17D可能通过活化NF-κB途径上调SKOV3细胞PD-L1 m R NA和蛋白的表达水平。2.RhIL-17D可能通过活化NF-κB途径增强卵巢癌细胞的体外增殖、迁移和侵袭能力。