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嗜酸氧化亚铁硫杆菌(A cidithiobacillus ferrooxidans; At. ferrooxidans)是生物冶金工业中十分重要的一种细菌。它是一种嗜酸的,需氧的,化能自养的,γ型蛋白质细菌,它的能量来源是通过氧化亚铁或氧化还原性无机硫,最适pH为1.8—2.2。NRAMP (natural resistance-associated macrophage protein)家族的功能是转运金属离子,从细菌到人都发现NRAMP的存在。在At. ferrooxidans中,有两个NRAMP成员,它们是AFE2126和AFE2920。本文首先通过测序At. ferrooxidans DC和At. ferrooxidans DY15两株菌的AFE2126和AFE2920基因,通过序列比对发现At. ferrooxidans DC的AFE2126基因与标准菌At. ferrooxidans ATCC23270的AFE2126基因序列完全相同,而At. ferrooxidans DY15菌的AFE2126基因序列与标准菌At. ferrooxidans ATCC23270菌的AFE2126基因序列相比,有7处碱基位点发生了突变,但由于氨基酸的简并性,只有一个氨基酸位点发生了突变(T48),由苏氨酸(T48,At. ferrooxidans DC)突变成蛋氨酸(M48, At. ferrooxidans DY15); At. ferrooxidans DC的AFE2920基因与标准菌At. ferrooxidans ATCC23270的AFE2920基因序列完全相同,At. ferrooxidans DY15的AFE2920基因序列与标准菌At. ferrooxidans ATCC23270的AFE2920基因序列相比有12处发生了突变,但由于氨基酸的简并性,只有一个氨基酸位点发生了突变(A343),丙氨酸(A343, At. ferrooxidans DC)突变成缬氨酸(V 343, At. ferrooxidans DY15)。通过蛋白质亚细胞定位(PSORTb v2.0 server),得知At. ferrooxidans DC和At. ferrooxidans DY15的AFE2126和AFE2920蛋白质均位于细胞质膜上;通过跨膜分析(TMHMM v2.0 server),得知AFE2126和AFE2920蛋白质均跨膜11次。通过转运基序分析(Motif Scan server)得知At. ferrooxidans DC和At. ferrooxidans DY15的AFE2126和AFE2920的NRAMP保守转运基序分别为5’-QVIASIFMPAAMLFLLMLLNDREIMGSYVNRR-3’和5’-IITAAQSGAQWGFKLLLLQFVLMPILYIVQELTVRLGIFTGK-3’。通过PCR和测序得到At. ferrooxidans DC的7个候选内参基因的序列和大小为AFE2121(map,810 bp), AFE2475(gmk,639 bp), AFE2714 (rplL,387 bp), AFE2150(gyrA,2538 bp),AFE2114(recA,1038 bp), AFE1680(era,915 bp), AFE2711(rpoC,4155 bp)。通过序列比对发现,这7条序列与标准菌At.ferrooxidans ATCC23270的AFE2121(map), AFE2475(gmk), AFE2714(rplL), AFE2150 (gyrA), AFE2114(recA), AFE1680(era), AFE2711(rpoC的序列完全相同。用RT-qPCR (the Reverse Transcription fluorescence-based quantitative real-time PCR)分析了At. ferrooxidans DC菌在6个不同培养条件下的7个候选内参基因的转录水平,用geNorm评估了7个候选内参基因mRNA的转录稳定性,转录稳定的顺序由大到小是era, gmk, rpoC, gyrA,recA, map, rplL。选择mRNA转录最稳定的3个基因(era,gmk, rpoC)作为目标基因的内参基因,研究了At. ferrooxidans DC目标基因AFE2126和AFE2920基因的mRNA在不同亚铁离子的浓度下的转录水平,表明随着亚铁离子浓度的增加,基因AFE2126的转录水平降低,但是AFE2920基因转录水平没有明显变化趋势。