瓦布贝母地上部分开发利用研究

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瓦布贝母为百合科贝母属植物瓦布贝母FritiLlaria unibracteata Hsiao et K.C.Hsia var.wabuensis(S.Y.Tang et S.C.Yue)Z.D.Liu,S.Wang et S.C.Chen的干燥鳞茎,具有止咳化痰、清热散结的功效。瓦布贝母为2010年版《中国药典》川贝入药项下新收载的品种。瓦布贝母习用鳞茎,其有效部位为异甾体类的生物碱成分。据文献报道,瓦布贝母地上部分的生物碱成分和鳞茎部分大致相同,但对其深入系统的研究报导较少。由于长期形成的用药习惯,瓦布贝母的地上部分基本弃之不用。随着灾区瓦布贝母栽培面积的迅速扩大以及地下资源的匮乏,其地上部位的开发利用价值迅速受到关注。本课题对瓦布贝母地上非药用部位与地下鳞茎的化学成分进行定性、定量研究,对总生物碱含量和代表性生物碱的含量进行比较,并对贝母地上部位提取物进行工艺考察,得到最佳提取和纯化工艺。  通过薄层色谱法和高效液相色谱法对瓦布贝母地上非药用部位与地下鳞茎的化学成分比较研究,表明瓦布贝母地上非药用部位主要含有生物碱、皂苷等化学成分,其主要生物碱有贝母素甲、贝母素乙、西贝碱等,此外,从高效液相色谱图中还可看到其他一些含量较地下部位高的末知生物碱类成分。  在《中国药典》2010版一部川贝母项下和附录项下中药质量标准分析方法验证指导原则的指导上,对测定瓦布贝母地上部分、地下部分和提取物的总生物碱含量的方法-酸性染料进行了方法学考察,结果该方法的线性关系和范围、精密度、重复性、稳定性和加样回收率均符合药典要求,表明该方法对测定瓦布贝母地上和地下部分总生物碱含量切实可行。  通过对地上部分药材和地下部分鳞茎的进行薄层比较和高效液相比较,得出瓦布贝母地上部分具有同地下部分相同的生物碱种类。以贝母素甲和贝母素乙为代表性生物碱,利用HPLC-ELSD,采用两点法对瓦布贝母地上和地下部分贝母素甲和贝母素乙的含量进行对比研究,结果显示地上部分贝母素甲和贝母素乙的含量均高于地下部分。  在提取工艺方面,以提取液中总生物碱含量为指标,筛选了提取方法,结果以回流提取法提取效率最高;考察了不同的提取溶剂,结果以中性乙醇提取效果最好;对提取前药材浸泡时间、提取时间、料液比、乙醇浓度进行了单因素考察,并采用响应面法对提取时间、料液比、乙醇浓度三个具有变化趋势的因素进行优化,优选了瓦布贝母地上部位提取物的提取工艺,结果用25倍量浓度为75%的乙醇溶液浸泡药材1.5h后提取药材,提取次数为2次,每次1.0h,此时提取得到的提取物中总生物碱含量最高。  在纯化工艺方面,以大孔吸附树脂为富集纯化方法,以大孔吸附树脂吸附量和解吸量为指标,筛选了不同极性不同型号的4种大孔吸附树脂,结果以X-5大孔吸附树脂纯化效果最好;对动态吸附量进行考察,结果X-5大孔吸附树脂的最大吸附量为5.221 mg/g;对上样pH值进行考察,结果上样pH值为8.5时上样量最大;对洗脱液种类进行考察,结果用酸性乙醇为洗脱液洗脱效果最好;分别对洗脱液浓度、洗脱液用量、洗脱液pH值进行了单因素考察,考察结果为洗脱液浓度为75%、洗脱液用量为50倍、洗脱液pH值=3时洗脱效果较好。  通过对瓦布贝母地上非药用部位提取物的质量控制的研究,对其水分、灰分、重金属、性状鉴别、含量测定等进行研究,建立提取物的质量控制标准,为提取物的进一步开发利用奠定了基础,初步确定提取物的水分少于7%、总灰分少于5%,总生物碱含量能不少于18%。
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