论文部分内容阅读
目的：观察硫化氢对大鼠肝星状细胞PI3K/Akt信号通路的影响及PI3K/Akt信号转导通路在硫化氢影响肝星状细胞Ⅰ、Ⅲ型胶原表达中的作用，进一步探讨硫化氢在延缓肝纤维化发生中的具体机制。方法：（1）体外培养大鼠肝星状细胞（HSC-T6），以硫氢化钠(NaHS)作为外源性的硫化氢供体，将肝星状细胞分为2组，正常对照组给予0μmol/l的硫氢化钠，硫化氢组给予50μmol/l的硫氢化钠处理细胞，提取细胞总蛋白后用western blot法检测HSC-T6中PI3K、p-Akt、Gsk-3β和Bad蛋白的表达。（2）体外培养大鼠肝星状细胞（HSC-T6），通过外源性H2S预处理体外培养的HSC，同时给予PI3K/Akt信号转导通路的特异性阻断剂（LY294002），将肝星状细胞分为5组：正常对照组（N组）；硫化氢预处理组（S组），给予50μmol/l的硫氢化钠（NaHS）预处理；二甲基亚砜溶质组（DMSO，D组），给予终浓度为1‰DMSO的培养基；LY294002抑制剂组（LY组），给予含有50μmol/l的LY294002及1‰DMSO的培养基干预细胞；LY拮抗硫化氢组（LY+S组），给予含有50μmol/l的LY294002，NaHS终浓度为50μmol/l、DMSO终浓度为1‰的培养基干预细胞。RT-PCR法测定HSC的Ⅰ型、Ⅲ型胶原蛋白mRNA的表达，western blot法检测PI3K/Akt信号转导通路上游蛋白PI3K、p-Akt的表达。结果：（1）与正常对照组相比，硫化氢组细胞密度较正常组大，细胞间隙变小，细胞增殖明显，硫化氢处理组PI3K、p-Akt蛋白的表达明显增加，差异有统计学意义（P<0.05）,Gsk-3β、Bad蛋白的表达未见明显差异（P>0.05）。（2）与正常对照组相比，单独给予硫化氢组肝星状细胞I型、Ⅲ型胶原蛋白mRNA的表达增强（P <0.05），PI3K、p-Akt蛋白的表达增强（P<0.05），与硫化氢组相比，同时给予H2S和LY294002组，Ⅰ型、Ⅲ型胶原蛋白mRNA的表达减弱（P<0.05），PI3K、p-Akt蛋白的表达减弱（P<0.05）。结论：（1）硫化氢能够激活大鼠肝星状细胞PI3K/Akt信号转导通路。（2）硫化氢可能通过激活肝星状细胞PI3K/Akt信号转导通路，增强肝星状细胞I型、Ⅲ型胶原蛋白mRNA的表达，进而促进肝纤维化的发生。