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本学位论文初步研究了食蟹猴繁殖生物学相关内容。论文共分两大部分:第一部分为文献综述,即第一章;第二部分为试验研究,包括第二、第三和第四章。 第一章综述了食蟹猴的分类地位和生殖生理,动物电刺激采精及精液生物学特性,动物排卵期的测定方法,雌性动物月经周期雌二醇和孕酮分泌水平的研究。 第二章为食蟹猴电刺激采精及精液生物学的初步研究。本章共分为三部分: 1、食蟹猴电刺激采精及精液特性的初步研究。采用阴茎电刺激采精法对食蟹猴进行电刺激采精和精液特性的初步研究。电刺激参数设为电压32-56V,频率25-30Hz,波宽固定为10ms,电刺激时间1-10s,食蟹猴在非麻醉情况下成功采精,采精量为0.20±0.16mL。在采精过程中没有发现阴茎损伤。同时对食蟹猴精液特性进行了初步研究,结果发现精子的活力为88.37±9.33%,精子密度为2169.79±1922.38×106个/mL。用扫描电子显微镜观察发现食蟹猴精子的特点是头部长径比较短而显两端较钝圆的卵圆形,长5.06±0.28μm,宽3.17±0.20μm;尾部中段长10.36±0.36μm,主段和末段长51.6±1.52μm。平均死精子率为9.1%,平均畸形率为13.1%,平均顶体异常率为3.3%。 2、计算机辅助精液分析系统对食蟹猴精液的分析 目的:用计算机辅助精液分析系统(CASA)对食蟹猴精液进行分析,以揭示食蟹猴的精液生物学特性,为在人工饲养食蟹猴的繁殖实践中进行精液品质鉴定提供相关的测定数据。方法:采用CASA系统对29例雄性食蟹猴精液样本进行分析。结果:(1)静态特性:食蟹猴的精子密度为2134.53±2052.87M/mL;活动精子密度为1955.36±1939.59M/mL,活动精子百分率为88.79±9.09%;前向运动精子密度为1263.98±1271.13M/mL,前向运动精子百分率为59.58±16.43%;快速相细胞百分率为82.76±13.10%。(2)动态特性:①精子活动性检测:食蟹猴精子的平均路径速度为133.78±58.22μm/s,直线速度为121.43±56.64μm/s,曲线速度为169.78±52.39μm/s,精子头侧摆幅度为4.19±0.72μm,平均摆跨频率(鞭打次数)为29.79±4.30Hz,前向性为84.62±5.46%,直线性为63.62±13.07%。②精子活力分级:食蟹猴精子的快速相浓度为1844.97±1875.96M/mL,百分率为82.76±13.10%;中等相浓度为110.18±139.33M/mL,百分率为5.93±5.26%;慢速相浓度为85.74±144.32M/mL,百分率为3.62±2.90%;静止相浓度为93.99±72.85M/mL,百分率为7.69±8.20%。(3)精子形态参数:食蟹猴精子的头长比为61.93±4.4.14%;头部面积为7.33±1.22(μmsq)。 3、食蟹猴精液常温和低温保存 测定在常温(15-25℃)、低温(0-5℃)和生理温度(37℃)三种状态下食蟹猴精子在精液保存液中的存活时间,存活指数;研究食蟹猴精液保存液的最佳配方。结果:(1)在生理温度(37℃)和常温(15-25℃)时,食蟹猴精子在TALP保存液中的存活时间分别为12.94±5.57h,58.59±40.91h;存活指数分别为4.88±1.97,24.48±17.94。(2)低温0-5℃时,食蟹猴精子在(TALP+20%蛋黄)保存液中存活时间为52.67±4.12h,在低温保存液1中存活时间为142.33±35.59h,在(TRIS+20%蛋黄)保存液中存活时间为596±83.35h,并经方差分析,它们的差异具有显著性(p<0.01)。(3)低温0-5℃时,食蟹猴精子在(TALP+20%蛋黄)保存液中的存活指数为22.49±3.91,在低温保存液1中的存活指数为87.62±15.53,在(TRIS+20%蛋黄)保存液中的存活指数为283.05±49.42,并经方差分析,它们的差异具有显著性(p<0.01)。结论:根据以上结果提示,在本实验中,食蟹猴精液在低温0-5℃保存时,(TRIS+20%蛋黄)保存液为最优配方;在生理温度(37℃)和常温(15-25℃)保存时,TALP保存液对食蟹猴精液处理、保存效果良好。 第三章研究了食蟹猴排卵期的测定方法。本章包括以下三部分: 1、食蟹猴阴道涂片的动态观察 本试验的目的是,为食蟹猴实施人工授精和适时配种提供一种有效的测定排卵期的方法。选择4-6岁性成熟的雌性食蟹猴30只,对其阴道涂片进行动态观察。结果表明,食蟹猴阴道涂片中主要有角化上皮细胞、中层基底细胞、白细胞和细胞碎片等。说明白细胞数各时期差异均具显著性(P<0.05);角化上皮细胞在月经前期和月经期没有差异,但其它各期差异具显著性(P<0.05);月经期和月经后期中层基底细胞数目变化差异不显著,但其它各期差异具显著性(P<0.05);月经前期和月经期的细胞碎片数目相似,但其它各期差异具显著性(P<0.05)。各时期细胞成份变化规律是,角化上皮细胞从月经期到排卵期呈逐渐增加至最高,然后逐渐减少;而白细胞、中层基底细胞和细胞碎片则恰好相反。 2.宫颈粘液NaCl浓度法测定食蟹猴排卵期的研究。 目的:为人工养殖食蟹猴提供一套有效的确诊雌性食蟹猴排卵期的方法。方法:选用广西壮族自治区营林开发中心实验动物基地30只4-6岁健康雌性食蟹猴,利用硝酸银(AgNO3)、氯化钠(NaCl)与铬酸钾(K2CrO4)的显色反应测定它们宫颈粘液NaCl浓度的变化,同时每天观察记录它们性体征的变化,测定天数为至少一个月经周期。结果:有25只占83.33%的雌猴的阴道粘液NaCl浓度最高达0.9%,其中雌猴NaCl浓度变化呈规律的曲线,宫颈粘液鉴定法测得雌猴的月经周期长度为26.44±3.14天。 3、用基础体温和基础体重法测定食蟹猴排卵期的研究 方法:选30只4-7岁健康雌性食蟹猴,单独放置在特定的笼舍内饲养1周,待应激基本消失后,每天清晨8:00测量它们的基础体温(BBT)、基础体重及观察记录它们发情的体征以及阴道分泌物的情况。测定时间为一个月经周期。同时每天记录笼舍环境温度。结果:(1)雌性食蟹猴黄体期基础体温比排卵日的基础体温高1.53℃±0.45℃。具有明显发情排卵特性体温曲线的有16只,占53.33%。(2)雌性食蟹猴排卵日体重平均增加0.40kg±0.18kg,达11.86±5.82%。 第四章为雌性食蟹猴月经周期雌二醇和孕酮分泌水平的研究。本试验目的是弄清雌性食蟹猴月经周期雌二醇和孕酮的分泌水平,以及因肥胖不孕雌猴雌二醇和孕酮的分泌特点。试验随机选用可繁雌性食蟹猴30只,每天观察记录其性皮肤变化和阴道分泌物的情况,然后从中选择10只性皮肤和阴道分泌物均较明显显示发情的雌猴,每天采取血清样本,然后用荧光偏振免疫分析法测定雌二醇和孕酮的含量,同时每天观察并记录性皮肤和阴道分泌物变化情况,依据性皮肤和阴道分泌物变化来确定性周期,并以性周期的天数为采血天数,然后对结果进行分析。结果表明,可繁雌性食蟹猴的雌二醇变化范围为320.40±119-26.50±13.69pg/mL,孕激素的变化范围为7.26±3.33-0.62±0.08ng/mL,月经周期的第21.38±7.3天为雌二醇峰值和第29.38±7.19天为孕酮峰值。食蟹猴的月经周期天数为36.4±5.97天,黄体期天数为14.3±1.11天,滤泡期天数为22.1±2.28天,其中行经天数为3-4天。同时对因为肥胖无法怀孕的雌性食蟹猴8只进行对照试验,结果表明,其雌二醇变化范围为95±60.44-13±7.39pg/mL,孕激素的变化范围为0.70±0.41-0.10±0.09ng/mL,其雌二醇的峰值和孕酮的峰值与正常可繁雌猴相比差异显著(p<0.05),其雌二醇的最低值和孕酮的最低值与可繁雌性猴相比差异不显著(p<0.05),说明肥胖雌猴本身生殖激素的内分泌已经紊乱,由此可以推测因肥胖引起生殖激素内分泌紊乱是导致不孕的原因之一。