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在表皮低氧压力的微环境中,低氧可通过影响低氧诱导因子(hypoxia inducible factors,HIFs)依赖基因的表达来影响角质形成细胞的分化和表皮屏障功能的形成。维甲酸相关的孤儿核受体(Retinoid-related orphan receptora,RORα)作为类固醇核激素受体超家族的成员,广泛分布在机体的各个组织中。目前有研究发现,低氧可以在不同组织中上调RORA基因的转录,但是在皮肤中还尚未发现此类报道,同时在皮肤低氧环境下,RORα对角质细胞分化与表皮屏障功能的影响及分子机制也尚不明确。目的:本研究将重点探究在低氧条件下,RORα与HIF-1α在角质形成细胞中的相互作用关系,从而为表皮屏障功能障碍类疾病的治疗提供新的靶点。方法:1.体外培养人永生化角质细胞HaCat和小鼠永生化角质细胞PAM212,通过Real-time PCR和Western blotting检测低氧对RORα和相关分化标志基因表达的影响。2.通过siRNA瞬时沉默RORα、HIF-1α的表达,或shRNA构建RORα沉默的稳定细胞系,确定低氧条件下RORα对角质细胞分化的影响。3.利用Caspase 3/7活性分析方法、对凋亡标志PARP蛋白的检测和流式细胞技术,分析RORα在低氧时对角质细胞存活的影响。4.利用RORα沉默或RORα高表达的稳定细胞系,采用Western blotting、Luciferase assay和细胞免疫荧光技术,分析低氧时RORα在角质细胞中对HIF-1α蛋白表达的影响,进一步确定作用机制。结果:1.在人角质形成细胞和小鼠角质细胞中,低氧可以诱导RORα的高表达,同时促进角质细胞的分化。2.干扰RORα或HIF-1α的表达会阻碍角质细胞的分化。3.HIF-1A基因沉默下调RORα的表达,说明HIF-1α可能作为RORα的上游调控者影响角质细胞的分化。4.在角质形成细胞中,RORα的升高可以抑制低氧引发的细胞凋亡,形成促存活的保护作用。5.在角质细胞中,低氧诱导的RORα可增加HIF-1α蛋白的稳定性并促进其在细胞核中的积累,进而增强HIF-1A的转录活性。结论:综上所述,我们揭示低氧诱导的RORα通过稳定HIF-1α蛋白的表达、促进HIF-1α蛋白在细胞核中的积累,进而增强其转录活性调节相关基因的表达,最终保护角质形成细胞的存活并促进角质细胞的存活和晚期分化,从而保证表皮屏障功能的形成。