肝癌发生过程中差异表达基因的研究

来源 :广西医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:zhulimin520
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目的 对应用基因芯片筛选的树鼩诱发性肝细胞癌(HCC)差异表达基因——超氧化物歧化酶1(SOD1)、谷胱甘肽转移酶A1(GSTA1)、干细胞因子(SCF)、血小板生成素(TPO)等用逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)、免疫组织化学等方法检测它们在树鼩HCC、癌旁和癌前活检肝组织以及人HCC、癌旁肝组织中的表达情况,以进一步验证基因芯片检测的结果,并探讨这些基因在HCC形成中的作用。 方法一、动物HCC部分:①实验树鼩随机分为两组,实验组给予黄曲霉毒素B1(AFB1),对照组不给予AFB1;②取实验组11例发生HCC动物的HCC组织、癌旁及癌前活检肝组织,用半定量RT-PCR方法检测SOD1、GSTA1、SCF、TPO、HIAP1、TMSB10、NOP120 mRNA的表达水平;③对扩增出来的树鼩SoD1、GSTA1、SCF基因片段进行测序;④对实验组出癌动物的HCC组织、癌旁、癌前肝组织及未出癌动物的第120周活检肝组织,以及对照组动物第45周、120周活检肝组织,用免疫组织化学方法检测SOD1、GSTA1蛋白的表达情况。二、人HCC部分:①用RT-PCR方法检测35例人HCC及相应癌旁肝组织中SOD1、GSTA1 mRNA表达情况;②用免疫组化方法检测35例人HCC及相应癌旁肝组织中SOD1、GSTA1蛋白的表达情况;③分析SOD1、GSTA1蛋白在HCC组织中的表达情况与相应临床指标的关系,包括患者年龄、肿瘤大小、肿瘤个数、有无胞膜、分化程度、患者血清AFP水平、HBsAg感染、有无门静脉癌栓、有无复发转移等。 结果一、动物HCC部分①至实验第165周,实验组54只树鼩中共有35只发生HCC,发生率为64.8%,对照组动物无一例出癌;②RT-PCR结果:所有11例树鼩HCC、癌旁及癌前肝组织经RT-PCR扩增后,均有SOD1、GSTA1、SCF、TPO、HIAP1、TMSB10、NOP120表达,但表达水平不同。SOD1 mRNA在树鼩HCC中表达水平明显低于癌旁及癌前肝组织(分别为1.200±0.926、万窟发生过窟价省尸浦送寡因肘歼广3.x43士1一34、2.945士1.432,均夕<0.01);GSTAlm丑NA在树韵HCC中表达水平明显低于癌旁及癌前肝组织(分别为1.149士0.320、2.247士1.201、2.“O士1.324,均户<0.05);scFmRNA在树晌HCC、癌旁及癌前肝组织表达水平依次升高(分别为0‘201士0.123、0.279士0.147、0.390士0.149)。其中HCC组织中SCFm丑NA表达水平明显低于癌前肝组织(p=0.003);TPO mRNA在树韵HCC、癌旁及癌前肝组织表达量水平依次升高(分别为0.161士0.096、0.1%士0.1 10、0.231士0.046)。其中HCC组织中TPO InRNA表达水平明显低于癌前肝组织,=0 .045);HIAPI、TMSB 10、NOplZO mRNA在树韵的HCC、癌旁及癌前肝组织中表达差别无显著性(娜>0.05);③DNA测序:树勃肝组织中扩增出SODI、GSTAI、SCF片段与人类相应基因分别有89%、90%、90%的同源性;④免疫组化结果:树韵HCC、癌旁、癌前及实验组未出癌动物第120周肝组织中,SODI蛋白表达的综合得分别为1 .5 14士1 .084、3.075士1.559、2.800士2.015、2.640士1 .188;对照组树韵第45周、120周肝组织中SODI蛋白表达的综合得分别为3.075士1.482、2.517士1.677;HCC中SODI蛋白表达的综合得分明显低于癌旁及癌前肝组织(均尸<0.05),也低于实验组未出癌第120周及对照组第120周肝组织(均尸<0.05)。癌前与对照组第45周、实验组未出癌第120周与对照组第120周肝组织比较,SODI蛋白表达水平无明显差别(均尸>0.05);树韵HCC、癌旁、癌前及实验组未出癌动物第120周肝组织中,GSTAI蛋白表达的综合得分别为2.391士1.899、3.000士1.212、3.769士2.379、 1.805士1.067;对照组树的第45周、120周肝组织中GSTAI蛋白表达的综合得分别为2.125士0.913、2.608士1.2n;Hcc中GsTAI表达水平与癌旁无明显差别(p=0.306),但明显低于癌前肝组织勿=0.015);GSTAI在HCC中的表达水平与实验组未出癌第120周及对照组第120周肝组织无明显差别(均夕>0.05);癌前肝组织中GSTAI蛋白的表达水平明显高于对照组第45周(p<0.001),实验组未出癌第120局肝组织GSTAI蛋白的表达水平明显低于与对照组第120周(p=0.013);二、人HCC部分①RT-PCR结果:在35例人HCC及癌旁肝组织中,SODI mRNA的表达水平在癌组织明显低于癌旁组织(分别为0.888士0.466,1.441士0.921,p<0.001);GsTAlmRNA的表达水平在癌组织为0.937士0.707,明显低于癌旁组织2.216士1 .601(p=0 .00);soDI与GSTAI两者InRNA表达水平无明显相关 (件一0.042,p=0 .810)。②免疫组化结果:SoDI蛋白在Hcc的表达率(71.4%)明显低于癌旁肝组织(943%),(p=0 .011);GSTAI蛋白在HCC和癌旁肝组织万碑君全过霍沪若异浦布蒸因种班处中表达阳性率分别为82.9%和100%,前者明显低于后者勿=0.025);SODI蛋白在HCC的表达综合得分明显低于癌旁肝组织(分别为1 .634士1.042、3.837士1 .432,p<0.001);在HCC、癌旁肝组织中GSTAI蛋白表达的综合得分别为3.300士2.110、7·446士1.930,前者明显低于后者勿<0.001);两种蛋白表达综合得分无明显相关(二一0.165,p=0 .344)。③蛋白表达与临床指标联系:SODI蛋白综合得分在病理分级为I级的人HCC中(2.557土1 .238),明显高于n级(1 .725劲.996)、111级(1 .264?
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